收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

小鼠形觉剥夺性近视眼模型Sonic hedgehog信号通路的表达及干预研究

钱宜珊  
【摘要】: 前言 随着近视眼在全球的发病率不断上升,针对近视眼的发病机制及防治方法的研究已成为全球公共卫生工作和防盲治盲的重点。目前有大量研究集中于寻找介导近视眼发生的信号机制,这其中包括各种胚胎期调控眼球发育的信号通路。Sonic hedgehog(Shh)是参与胚眼发育的关键调控因子。研究发现Shh的表达水平在小鸡实验性近视模型中发生改变,因此推测Shh可能是调控近视眼发生的信号通路之一。目前,对于Shh在近视眼发病机制中的作用,国内外尚缺乏系统性的研究,本课题围绕Shh在小鼠形觉剥夺性近视眼模型中的作用展开实验,目的是进一步阐明近视眼的发病机制,探索近视眼防治的新方法。 第一部分:小鼠形觉剥夺性近视眼模型的建立 目的:探讨建立小鼠形觉剥夺性近视眼模型(form-deprivation myopia,FDM)的可行性。比较半透明膜法和眼睑缝合法诱导小鼠FDM的效果。 方法:96只出生13-14天的C57B/L6小鼠随机分为半透明膜组(n=44)、眼睑缝合组(n=36)和对照组(n=16)。小鼠开睑当天即予佩戴半透明膜眼罩或缝合眼睑(均为单眼)。分别于形觉剥夺1周、2周和4周后验光、测量眼轴长度,并取视网膜行光镜、电镜检查。 结果:形觉剥夺1周、2周及4周后,半透明膜组的遮盖眼与对侧眼的屈光度差异分别为:-5.77±2.24D、-6.16±1.04D和-8.43±0.86D,眼轴差异分别为:0.030±0.044 mm、0.040±0.074 mm和0.071±0.088mm;三个时间点眼瞼缝合组的缝合眼与对侧眼的屈光度差异分别为:-5.83±2.33D、-6.13±1.19D和-9.33±0.94D,眼轴差异分别为:0.033±0.028mm、0.039±0.058mm和0.078±0.064mm;对照组双眼屈光度差异分别为:-0.10±1.25D、0.08±1.86 D和0.30±0.84D,眼轴差异分别为:0.020±0.090 mm、-0.017±0.056mm和0.008±0.137mm。1周及2周时半透明膜法和眼瞼缝合法诱导的近视眼模型在屈光度及眼轴改变方面的差异均无统计学意义,4周时眼睑缝合法诱导的近视程度大于半透明膜法(t=2.59,P=0.016)。与对照眼相比,FDM眼光镜下未见视网膜形态结构发生明显异常改变,电镜下发现FDM眼视网膜感光细胞外节膜盘间距增大,排列紊乱。 结论:半透明膜法或眼睑缝合法均可在C57B/L6小鼠中诱导出轴性FDM模型,两种方法诱导FDM的效果相近。建立小鼠FDM模型是可行的。 第二部分:形觉剥夺性近视眼小鼠视网膜Sonic hedgehog信号通路分子表达的研究 目的:研究Sonic hedgehog(Shh)及其下游信号分子Patched-1(Ptc-1)和Gli-3在FDM及正常小鼠视网膜组织的表达情况。 方法:150只出生13-14天的C57B/L6小鼠随机分为形觉剥夺组和对照组各75只。采用半透明膜法诱导FDM,分别于1周、2周及4周后验光并测量眼轴。每组各随机取3只(1×3)用于免疫荧光标记,6只(2×3)用于实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,real-time PCR),12只(4×3)用于Western-blot分析,检测FDM与正常小鼠的视网膜组织中Shh、受体Ptc-1以及核转录因子Gli-3在视网膜组织、mRNA及蛋白水平的表达情况。 结果:免疫荧光染色发现Shh、Ptc-1及Gli-3在出生后的小鼠视网膜中主要分布于神经节细胞层到外丛状层。Gli-3在非形觉剥夺眼的视网膜中主要分布于神经节细胞的细胞浆中,而在FDM眼中则主要表达于神经节细胞的细胞核内。根据荧光强度未能分辨FDM眼中上述各分子表达水平的变化。Real-time PCR及Western-blot检测发现:形觉剥夺1周及2周后FDM眼视网膜组织中的Shh mRNA及蛋白的表达水平均升高,4周后无显著改变;形觉剥夺1周后FDM眼视网膜组织中Ptc-1mRNA及蛋白水平均下降,2周后蛋白水平仍降低而mRNA水平无显著改变;形觉剥夺1周后FDM眼视网膜组织中Gli-3mRNA及蛋白水平均升高,2周后mRNA水平仍升高而蛋白水平则降低,4周后mRNA水平无显著改变,而蛋白水平降低。 结论:出生以后,Shh及其下游信号分子主要表达于小鼠视网膜的神经节细胞层和内核层。发生于FDM眼中的Gli-3的核转位及Shh通路分子表达水平的改变提示形觉剥夺可促使Shh信号通路激活。 第三部分:改变Sonic hedgehog信号通路活性对小鼠形觉剥夺性近视眼模型的影响 目的:了解兴奋或阻断Shh信号通路对小鼠FDM模型的影响。 方法:336只出生13-14天C57BL/6小鼠,随机分为Shh-N注射组和cyclopamine(特异性Shh通路阻断剂)注射组各168只。每组根据是否形觉剥夺(半透明膜法)及不同的药物注射剂量再各分为6组。分别行玻璃体腔内注射Shh-N或cyclopamine,形觉剥夺组注射遮盖眼,非形觉剥夺组随机选取一眼注射,两组均以未注射的对侧眼作为内部参照。两种药物均为隔天注射一次,共4次。最后一次注药后3天验光、测量眼轴长度并取视网膜行光镜、免疫荧光染色及Western-blot分析,检测注药后小鼠的屈光度、眼轴长度、视网膜病理形态及Shh、Ptc-1和Gli-3蛋白表达水平的变化。 结果:形觉剥夺眼内注射Shh-N促进FDM的形成及眼轴的延长,注射cyclopamine则抑制FDM的形成及眼轴的延长。非形觉剥夺眼内注射Shh-N可导致相对近视及眼轴延长,注射cyclopamine导致相对远视并抑制眼轴延长。以上效应均呈剂量相关性,以高浓度组较为显著。光镜下见注药后的视网膜形态无明显异常改变。免疫荧光染色发现非形觉剥夺眼内注射Shh-N促进Gli-3的核转位,形觉剥夺眼内注射cyclopamine部分抑制Gli-3的核转位。Western免疫印迹法发现注射Shh-N后Ptc-1下调而Gli-3上调;注射cyclopamine后Shh、Gli-3下调而Ptc-1上调。 结论:激活Shh通路促进FDM的形成及眼轴的延长,并促进正常小鼠的眼球向近视方向发展。阻断Shh通路抑制FDM的形成及眼球的延长,并促使正常小鼠眼球向远视方向发展。Shh通路阻断剂有可能成为近视眼预防及治疗的新选择。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张丹丹;唐宁;;形觉剥夺性近视与碱性成纤维细胞生长因子研究进展[J];医学综述;2009年15期
2 郭瑶,徐艳春;病理性近视眼的研究进展[J];国际眼科杂志;2003年02期
3 高建华;杨丽霞;郑金树;;形觉剥夺性眼病对眼轴的影响[J];福州总医院学报;2001年02期
4 刘景;王静;张晗;肖瑛;于兆华;;先天性白内障致形觉剥夺性近视32例临床分析[J];山东医药;2008年24期
5 蒋晶晶,刘双珍,王华,吴小影,谭星平,夏朝华;外源性碱性成纤维细胞生长因子对鸡形觉剥夺性近视眼的调控[J];国际眼科杂志;2005年05期
6 范惠民,阴正勤,高朋芬,王仕军;双眼形觉剥夺对大鼠视皮层神经元电生理特性的影响[J];第三军医大学学报;2003年21期
7 李秀娟;张金嵩;;氧自由基与形觉剥夺性近视[J];中国现代医学杂志;2009年16期
8 郭瑶,徐艳春;近视眼轴及巩膜改变的实验研究[J];中国实用眼科杂志;2003年03期
9 邓志宏;谭佳;刘双珍;赵少贞;汪建涛;;重组人胰岛素样生长因子2对豚鼠眼球发育的调控作用及其与形觉剥夺的关系[J];眼视光学杂志;2009年02期
10 薛文隽,杨其绛,吴国忠,巫向前;形觉剥夺对鸡近视眼形成的影响[J];医药导报;2001年07期
11 史煜;陈春生;钱益勇;吴昌凡;曾骏文;;哌仑西平抑制近视眼机制的研究[J];眼科研究;2007年06期
12 丁娟;赵堪兴;史学锋;崔丽红;陈霞;周南;;棉耳绒猴弱视模型的建立[J];中国实验动物学报;2007年06期
13 席晓勍;褚仁远;周行涛;;凹透镜诱导鸡眼屈光变化的研究[J];中国眼耳鼻喉科杂志;2003年01期
14 高前应,高如尧,王培杰,郭延奎,卢佩勇,蒙艳春,朱涛,李力;多巴胺对兔实验性形觉剥夺性近视形成的影响[J];眼科研究;2001年01期
15 吴君舒,钟兴武,聂昊辉,黄娟,葛坚;光学离焦和形觉剥夺对幼恒河猴正视化过程的影响[J];眼科学报;2004年02期
16 秦伟,阴正勤,王仕军,赵妍君;双眼形觉剥夺对大鼠视皮层神经元γ-氨基丁酸电流的影响[J];中华眼科杂志;2005年01期
17 李舒茵,赵朝霞,李蕴随;儿童性白内障形觉剥夺与眼轴长度关系探讨[J];眼科研究;1996年02期
18 初歌今!510060广州,张清炯!510060广州,成建定,申煌煊!510060广州,肖学珊!510060广州,黎仕强!510060广州;纤维连接蛋白在形觉剥夺眼和正常眼的差异表达[J];眼科研究;2001年02期
19 戴淑真,曾骏文,高岩,吴昌凡;形觉剥夺性近视鸡眼巩膜改变光电镜观察[J];眼科新进展;2004年06期
20 邓志宏,刘双珍,谭佳,谭星平;鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达[J];国际眼科杂志;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵娟;;Feasibility of 99mTc-TRODAT-1 Micro-SPECT imaging of dopamine transporter in animal retinas[A];第四届全国中青年核医学学术会议论文汇编[C];2008年
2 苑维;金明;邓辉;潘琳;刘海丹;;芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜AGEs及RAGE mRNA表达的影响[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
3 陈莎丽;龙颖;肖小敏;;高压氧对未成熟视网膜的影响[A];中华医学会第十三次全国高压氧医学学术会议论文汇编[C];2004年
4 陈芳;糜漫天;白雪;许红霞;陈卡;;牛磺酸营养干预下缺氧大鼠视网膜中葡萄糖转运蛋白1的表达[A];第二届中国西部营养学术会议专题报告及论文摘要汇编[C];2006年
5 李艳;余振珏;靳磊;周国民;;胚胎大鼠视网膜的体外培养和鉴定[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
6 苑维;金明;潘琳;邓辉;;红参对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的影响[A];第三次全国中医、中西医结合眼科学术交流会论文汇编[C];2003年
7 刘晓强;刘晓强;李文生;柯治生;;伴有视网膜下异常增殖块的先天性视网膜脉络膜缺损一例报道[A];2007年浙江省眼科学术会议论文集[C];2007年
8 陈丽峰;阴正勤;陈中山;曾玉晓;田春雨;翁传煌;;视网膜干细胞分化不同阶段电压门控离子通道的特点[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
9 陈中山;阴正勤;翁传煌;陈丽峰;曾玉晓;;视网膜变性过程中神经节细胞melanopsin蛋白的表达[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
10 池新昌;洪朝阳;张静荘;徐海铭;夏贤闵;;视网膜蔓状血管瘤继发青光眼一例[A];浙江省中西医结合学会眼科专业委员会第十次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 钱宜珊;小鼠形觉剥夺性近视眼模型Sonic hedgehog信号通路的表达及干预研究[D];复旦大学;2008年
2 陈敏洁;视网膜Sonic hedgehog信号通路在豚鼠形觉剥夺性近视眼模型中的作用机制研究[D];复旦大学;2012年
3 潘爱华;视网膜内Kir通道的分布、表达和发育[D];中南大学;2004年
4 梁睿;Sonic hedgehog信号通路在小肠损伤修复中的作用[D];重庆医科大学;2010年
5 吕勇;视黄酸及其受体RARβ在形觉剥夺性近视中作用的研究[D];郑州大学;2005年
6 张伟;单眼形觉剥夺性弱视猫的多焦视网膜电图、视皮层同步发放电位及超微病理的研究[D];天津医科大学;2002年
7 戴若莲;Sonic hedgehog信号通路在皮层神经元氧化应激中的保护作用及机制研究[D];华中科技大学;2011年
8 王陆飞;骨髓间充质干细胞向视网膜样结构诱导分化的体外和体内研究[D];吉林大学;2004年
9 赵明威;自由基、活性氧在视网膜光损伤中的作用及机理研究[D];中国协和医科大学;1995年
10 王楷迪;Sonic hedgehog信号通路在大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞损伤中的保护作用及机制研究[D];复旦大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏云;幼猫近视眼模型眼轴、屈光度及眼球壁形态变化的实验研究[D];中国医科大学;2002年
2 王沙;bFGF和iNOS在小鼠形觉剥夺性近视眼视网膜中表达及作用的研究[D];中南大学;2010年
3 荣华;倍他洛尔对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用[D];武汉大学;2005年
4 李伟;大鼠CRX基因的重组慢病毒载体LV-Rho-EGFP/CRX的构建和表达[D];中南大学;2008年
5 陈宁;新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化[D];中南大学;2003年
6 郑斌;神经生长因子蛋白及其mRNA与形觉剥夺性近视发展的关系[D];郑州大学;2004年
7 陈小虎;雌激素对视网膜光损伤的保护作用[D];四川大学;2005年
8 齐世欣;台盼蓝对视网膜毒性的实验研究[D];天津医科大学;2006年
9 余涛;兔胚胎视网膜神经上皮和色素上皮联合移植到大鼠视网膜下腔的研究[D];第三军医大学;2002年
10 沈蔚;NOS抑制剂对大鼠急性视网膜缺血c-Fos蛋白表达的影响[D];昆明医学院;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;吸烟易致老年视网膜黄斑退化[N];中国中医药报;2006年
2 吴星伟 张皙 孙晓东;革新视网膜电脑技术精确评价视功能[N];中国中医药报;2007年
3 高萍;饮食防视网膜黄斑退变[N];医药养生保健报;2007年
4 张景华;皮肤细胞“变身”视网膜[N];大众卫生报;2008年
5 SXY;超越视界?[N];电脑报;2010年
6 ;人造视网膜试验让盲人见光[N];新华每日电讯;2006年
7 徐铮奎;四环素可防治老年性视网膜黄斑退化[N];大众卫生报;2006年
8 王明辉;为什么一些老年人会眼花[N];家庭医生报;2007年
9 北京武警总医院副教授 徐春;糖尿病性视网膜病变常用两类药[N];大众卫生报;2009年
10 保健时报记者 吴玲娟;夜间驾车多用眼角看[N];保健时报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978