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再损伤对面神经再生的影响及相关机制研究

倪玉苏  
【摘要】: 第一篇再损伤对面神经再生的影响及相关机制研究 目的:探讨再损伤与面神经再生的关系及其相关机制;并对损伤后不同时间点再损伤后面神经的再生状况进行比较,总结再损伤可以明显促进再生的最长时间域。 方法:建立成年雄性Wistar大鼠的面神经损伤及再损伤动物模型:第一组:在右侧茎乳孔外3mm切断面神经(包括耳后支),丝线标记近脑端,远脑端切除2mm,并用3/0丝线结扎防止再生连接。第二组:断伤后再断伤组:在第一次神经切断后12,,20,28,36,48W(周)时,再次在原来断伤近脑段断端以上1.0mm处再次切断面神经残余端。第三组:双侧断伤+右侧再断伤组:在第一次神经切断后12W(周)时,再次手术暴露双侧面神经残端,并在右侧面神经原来断伤近脑段断端以上1.0mm处再次切断面神经残余端。左侧直接关闭切口。第四组:断伤后再断伤+使用cyclopamine阻断shh(Sonic Hedgehog)信号通路组:在第一次神经切断后16W(周)时,再次在原来断伤近脑段断端以上1.0mm处再次切断面神经残余端,并在神经干近脑端断端放置浸有不同浓度Shh阻断剂Cyclopamine(浓度为1.0μg/ml,5.0μg/ml,10μg/ml,溶解于45%(w/v)2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin in PBS)的明胶海绵1.0mm~3;另外一组单纯浸有45%(w/v)2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin in PBS)1.0mm~3。丝线结扎远脑端及标记近脑端。所有实验动物,单侧神经切断作为实验侧,对侧未手术侧作为对照。通过脑干面神经核冰冻切片免疫组织化学,RT-PCR,Western blotting分析研究损伤后及再损伤后面神经核内GAP43,Shh及Smoothened表达情况。对面神经核的存活的神经元进行计数,并通过透射电镜等检测面神经主干在再损伤后轴突再生状况。 结果:4个月内面神经再损伤后实验侧面神经运动神经元GAP43表达上调。同时,面神经神经元Shh及其受体SmoothenedmRNA表达上调。实验侧面神经运动神经元GAP43表达上调与shhmRNA和Smoothened mRNA的上调有关。断伤后不同时间点的再损伤诱发面神经再生的效应不同,5-7个月后的再损伤侧运动神经元GAP43表达与对侧相仿或略高于对照侧,大于9月以后弱于对照侧。Shh信号通路阻断后SmoothenedmRNA表达下调,同时GAP43mRNA表达下调。透射电镜同样可以观察到shh信号通路阻断后,再生的轴突数目减少甚至几乎消失。 结论:再损伤可以促进面神经再生,但与面神经第一次断伤后再次损伤的时间点相关,4月内再损伤可以明显地促进再生,而超过5个月后的再损伤,面神经再生能力逐渐与对照侧相似或弱于对照侧。再损伤促进面神经再生的机制与Shh信号通路激活有关,阻断信号通路再生减弱。 第二篇颞骨三维重建面神经及其毗邻结构三维形态学研究 目的:基于PC(personal computer)机颞骨CT三维重建,探讨并总结出一套有效的、量化面神经及其毗邻重要结构空间相对关系的定位研究方法,以便指导耳科及侧颅底手术。方法:使用3D-DOCTOR软件对34例成人轴位CT影像进行三维重建,显示颞骨内各重要结构的三维形态及其相互间复杂的立体关系。并用软件自带的功能测量面神经及其毗邻结构之间的距离和相对角度。分析测得的数据,总结面神经与其毗邻解剖标志结构之间的相对关系。结果:重建获得清晰的三维图象,包括面神经,鼓环,听小骨,匙突,锥隆起,内听道,耳蜗,半规管,颈静脉球窝,颈内动脉管等颞骨内结构。准确测量三维模型中面神经及其毗邻结构之间空间关系,进行分析和总结面神经及其毗邻结构之间量化的数据,并发现一定的规律性。并特别详细地描述垂直段面神经和乳突表面及鼓乳裂的空间关系。这非常有益于在相关手术中进行面神经定位。结论:颞骨CT三维重建可以准确地显示其内部各解剖结构及其相互间的空间立体关系,这些面神经及其毗邻结构之间相对关系量化的参数非常有利于颞骨内手术。


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