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大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中神经肽Y及其Y1、Y2受体表达的影响

李琴  
【摘要】: 糖尿病肾病(DN, diabetic nephropathy)是糖尿病(DM, diabetes mellitus)常见的慢性并发症之一,在DM患者中约30%会发生DN。目前,在欧美国家,DN是引发终末期肾病(ESRD, end stage renal disease)的首要原因。然而糖尿病肾病的发病机制尚未完全明确,且目前尚无特效的治疗方法。糖尿病肾病的发病因素包括:血糖控制不佳、高血脂、肾脏的血液动力学异常等。大量文献报道神经肽Y(NPY, neuropeptide Y)及其受体与糖尿病及其并发症的发病密切相关,但糖尿病状态下肾脏中NPY及其Y1、Y2受体表达的情况,尚未明了。大黄酸是中药大黄的主要成分,具有降糖调脂、防治糖尿病肾病等广泛的药理作用,但对其机制研究较少。本实验以链脲佐菌素(STZ, streptozotocin)建立糖尿病大鼠模型,探讨肾脏中NPY及其Y1、Y2受体表达变化情况,同时观察大黄酸的治疗效果,旨在阐明大黄酸肾脏保护作用的可能机制。 第一部分大黄酸对糖尿病大鼠肾脏的保护作用 目的:验证大黄酸对糖尿病大鼠糖脂代谢、肾脏病理变化的影响。 方法:8周龄健康雄性Wistar大鼠,体重200-220g(由复旦大学医学动物中心提供,清洁级)。在光/暗周期为12 h/12h(光照时间7:00-19:00)的条件下饲养于铁笼中,自由获得饲料和饮水。大鼠适应性饲养1周后,腹腔内一次性注射65 mg/kg链脲佐菌素(溶于0.1 mmol/L、PH 4.4的枸橼酸缓冲液)诱导糖尿病模型,正常对照组腹腔内一次性注射等体积的枸橼酸缓冲液。将糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组(DM,n=12)和大黄酸治疗组(DM-T,n=12),并以体重量鼠龄相匹配的正常大鼠作为正常对照组(NC,n=12)。从模型建立后第3天起,每日清晨给予大黄酸治疗组大黄酸(100 mg·kg-1·d-1,使用前用0.5%羧甲基纤维素钠配置成相应浓度的悬液)灌胃,其它两组用相同体积的溶剂灌胃,共10周。实验期间,所有大鼠均采用标准饮食,可自由饮水,未使用任何降糖药物。10周时,留取24h小时尿液测定24h尿蛋白定量,留取血标本及肾脏组织,检测空腹血糖(FBG, fasting blood glucose)、血脂及24h蛋白尿水平,糖原染(PAS,periodic acid schiff staining)观察肾脏病理变化。 结果:大黄酸可降低糖尿病大鼠血糖、甘油三酯(TG,triglyceride)、总胆固醇(TC,total cholesterol)、24h蛋白尿水平(P0.01),缓解糖尿病肾病的病理变化。 结论:大黄酸具有改善糖脂代谢紊乱,减轻DN病理变化的作用,这可能是其延缓DN的机制之一。 第二部分大黄酸对糖尿病大鼠肾脏中NPY及其Y1、Y2受体表达的影响 目的:从分子生物学角度阐明大黄酸治疗DN的可能机理。 方法:造模、分组、给药等同第一部分实验。取血完毕后,迅速取肾、下丘脑,采用放射免疫法、逆转录聚合酶链式反应、蛋白印迹等方法,观察各组大鼠下丘脑、肾脏中NPY浓度和肾脏中Y1、Y2受体基因、蛋白表达水平。 结果:’与正常对照组相比,糖尿病大鼠下丘脑和肾脏中NPY浓度明显升高(P0.01),肾脏中Y1和Y2受体的mRNA和蛋白表达增加(P0.05);大黄酸治疗后NPY及其Y1、Y2受体表达量显著低于糖尿病组(P0.05) 结论:10周糖尿病大老鼠肾脏中NPY及其Y1、Y2受体表达增加。大黄酸对STZ诱导的糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱、肾脏病变有一定程度的保护作用,可能与其调节神经肽Y及其Y1、Y2受体的表达有一定关系。


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