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黑芝真菌免疫调节蛋白的原核表达与功能研究

孔应予  
【摘要】:灵芝,乃是中国传统的药用真菌,无论是从史书记载,还是现代社会的调查研究,都不难发现,灵芝从古至今都在中国民间被广泛流传和使用。灵芝含有多种具有生理活性的化学物质,如灵芝多糖、灵芝酸、甾醇类、灵芝蛋白类、不饱和脂肪酸、维生素和矿物质等。真菌免疫调节蛋白(Fungal Immunomodulatory Protein,FIP)是一类小分子蛋白质,由灵芝(或其他高等担子菌子实体)分离而来。到目前为止,已分离得到了10种FIPs,即分别从赤芝(Ganoderma lucidum)、松杉灵芝(G.tsugae)、金针菇(Flammulina velutipes)、草菇(Volvariella volvacea)、紫芝(G.japoncium)、小孢灵芝(G.microsporum)、紫灵芝(G.sinensis)、云芝(Trametes versicolor)和鞭毛藻丛赤壳菌(Nectria haematococca)中分离得到的LZ-8(FIP-glu)、FIP-LZ9、FIP-gts、FIP-fve、FIP-vvo、FIP-gja、FIP-gmi、FIP-gsi、FIP-tvc及FIP-nha。本实验利用黑芝(Ganoderma atrum)FIP基因FIP-gat,构建了原核表达载体pET-30a::FIP-gat,并将构建的原核表达载体pET-30a::FIP-gat转化到大肠杆菌BL21宿主细胞,在大肠杆菌BL21中诱导表达重组黑芝真菌免疫调节蛋白(rFIP-gat)。在利用Ni-NTA柱纯化rFIP-gat后,进行了rFIP-gat对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凝集作用的实验研究。实验结果显示:黑灵芝真菌免疫调节蛋白能够在原核细胞中有效表达,表达出的rFIP-gat约占大肠杆菌总蛋白的59.5%,表达量约为29.76 mg/L;当5μg/mL rFIP-gat加入培养细胞6h后,MDA-MB-231就出现凝集反应,凝集作用的效果和细胞培养时间以及rFIP-gat浓度呈正相关,但效果不明显。该研究为黑灵芝真菌免疫调节蛋白的深入研究奠定了基础。


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