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南海北部陆坡不同水层微生物的多样性以及海洋细菌Kangiella的生理特性的初步研究

徐蕾  
【摘要】:本论文主要针对2015年夏季南海北部陆坡区海水样品中微生物多样性进行调查以及对海洋来源的Kangiella菌株的基本生理特点开展相关研究。采用针对细菌和古菌16S r RNA V4区域的PCR引物扩增获得300bp左右的序列后进行Mi-seq测序,对采集的海水样品中的微生物的多样性进行了评估。结果显示,细菌可归属为13个门类,其中Proteobacteria(变形杆菌门)和Actinobacteria(放线菌门)为主要门类;古菌分为5个门类,其中Euryarchaeota和Crenarchaeota为主要类群。在2014年秋季航次对同样海域的微生物多样性调查中发现,其中一个水层出现海洋康氏菌属(Oceanospirillales,Kangiella)微生物爆发式地增长,但是此类海洋细菌的生态功能未知。本文对Kangiella属的4个不同种的模式菌株,包括Kangiella profundi FT102,K.aquimarina DSM 16071,K.geojedonensis YCS-5和K.koreensis DSM 16069的生理功能进行了初步的研究。在2216E培养基及不添加Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)和K~+的2216E培养基中,比较了4株Kangiella模式菌株的生长情况;以2%的酪蛋白为底物,采用福林酚法分别检测以上4株菌株的胞外蛋白酶酶活;依据Kangiella菌株中保守存在的3个丝氨酸蛋白酶的基因(asp1、asp2和asp3)序列设计简并的PCR引物,克隆了K.profundi FT102菌株中的3个相似的蛋白酶编码基因和Mg~(2+)感知蛋白pho P/pho Q;使用实时定量PCR技术检测了Mg~(2+)、Ca~(2+)和K~+对3种保守的丝氨酸蛋白酶编码基因和pho P/pho Q表达的影响。结果显示,Na~+是4株海洋Kangiella菌株生长所必须的金属离子,Mg~(2+)和Ca~(2+)对4株菌株的生长及其中相关蛋白酶基因表达的影响不同。在不添加Mg~(2+)的2216E培养基中,K.koreensis DSM 16069菌株的生物量、胞外蛋白酶活和相关蛋白酶编码基因的转录量都显著的上升。


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1 徐蕾;南海北部陆坡不同水层微生物的多样性以及海洋细菌Kangiella的生理特性的初步研究[D];上海交通大学;2017年
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