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雄激素诱导的激酶SGK3对人卵巢颗粒细胞增殖和雌二醇合成的作用及机制研究

胡婧雯  
【摘要】:研究目的本研究旨在探究雄激素对颗粒细胞中血清-糖皮质激素激酶3(Serum-glucocorticoid-inducible kinase 3,SGK3)的调控以及SGK3对卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GC)增殖和雌激素合成的影响,进而研究多囊卵巢综合征尤其合并高雄激素血症的患者的卵泡发育障碍的调节机制,为临床多囊卵巢综合征患者治疗和助孕过程中的超促排卵提供新思路。研究方法收集PCOS患者和正常女性行IVF/ICSI助孕时卵泡液和颗粒细胞,比较黄素化颗粒细胞中SGK3的丰度及其与血清总睾酮的相关性。以颗粒细胞细胞系KGN和人原代黄素化颗粒细胞为细胞模型,采用小干扰RNA转染、受体抑制剂、实时定量荧光PCR、蛋白印迹杂交、细胞免疫荧光染色、细胞增殖实验、细胞周期实验、酶联免疫吸附实验(ELISA)等探究雄激素对颗粒细胞SGK3表达的调控,以及SGK3对人卵巢颗粒细胞增殖、细胞周期和雌激素合成的作用。研究结果1.PCOS患者的卵巢黄素化颗粒细胞中,SGK3丰度明显增加,且与外周血中总睾酮浓度呈明显相关性。2.体外添加双氢睾酮(DHT)可以剂量依赖地促进颗粒细胞中SGK3的表达。3.双氢睾酮(DHT)通过雄激素受体(androgen receptor,AR)促进颗粒细胞中SGK3的转录。4.体外敲低SGK3后,可以促进颗粒细胞的增殖。5.体外敲低SGK3后,可以促进颗粒细胞G1期至S期的转变。6.体外敲低SGK3后,可以促进颗粒细胞中芳香化酶的表达和雌二醇的合成。结论PCOS患者的卵巢颗粒细胞中SGK3表达增高,并与血清总睾酮水平呈正相关。体外添加雄激素通过AR促进颗粒细胞中SGK3的表达,颗粒细胞中高表达的SGK3抑制了颗粒细胞的增殖,使细胞阻滞在G1期,同时抑制颗粒细胞中芳香化酶的表达,使细胞内雄激素转化为雌激素受阻,导致PCOS患者卵泡发育停滞。


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