收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

肺炎克雷伯氏菌基因转化技术的研究

郑艳  
【摘要】: 现有的外源DNA引入肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的方法与外源基因转化大肠杆菌的方法雷同,就是用克雷伯氏菌质粒电穿孔转化克雷伯氏菌。虽然文献报道这种策略转化克雷伯氏菌效率很高,但是过去十余年来几乎没有人引用。我们采用这种方案转化克雷伯氏菌,转化效率只有103/μg质粒。这种低水平的转化效率,限制了克雷伯氏菌的分子生物学研究。 造成克雷伯氏菌低水平的转化效率可能与克雷伯氏菌厚厚的荚膜有关。这层荚膜既降低了细菌比重,很难离心回收细菌;又使电击或化学法在细菌表面打孔的难度加大。 我们采用荚膜合成缺陷株Mag A-,可以将细菌的转化效率提高1-2个数量级,证实荚膜的确是克雷伯氏菌有效转化的障碍。但是,转化效率还是不能与大肠杆菌的转化效率相比,提示还有其它的因素影响细菌的转化效率。我们尝试直接用质粒电穿孔转化固体培养基培养的肺炎克雷伯氏菌。出乎我们的意料,与液体培养基培养的克雷伯氏菌相比,固体培养基培养的克雷伯氏菌转化效率至少可以提高3个数量级。利用激光共聚焦显微镜观察,发现固体培养基培养的细菌形态、细菌间融合状态与液体培养基培养的克雷伯氏菌差异很大,提示细菌的细胞形态能够显著影响克雷伯氏菌的转化效率。基于这些观察,我们建立了克雷伯氏菌高效转化技术。我们正在利用该技术将一些外源基因引入克雷伯氏菌中表达,以及利用基因同源重组技术有目的地改造克雷伯氏菌的代谢途径,制造有用的工程菌株。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄澜,蒋观成,贾瑞胜,刘艳;肺炎克雷伯氏菌在大鼠中的检出及实验感染的观察[J];中国比较医学杂志;1993年Z1期
2 沈定霞,崔岩,赵丽萍,吴坚;对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯氏菌外膜蛋白图谱分析[J];中国抗生素杂志;1998年05期
3 何礼洋;韩文瑜;雷连成;贾艳;杨洋;;肺炎克雷伯氏菌Ⅲ型菌毛的研究进展[J];中国兽医杂志;2007年12期
4 陈兴生,叶育桐,陈永林;牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定[J];中国兽医杂志;1997年03期
5 徐海圣,舒妙安;中华鳖肺炎克雷伯氏菌病的病原研究[J];浙江大学学报(理学版);2002年06期
6 ;固氮作用[J];生物技术通报;1989年07期
7 赖小美;郭有能;肖黎莉;李海红;陈敏;李林;;肺炎克雷伯氏菌分布及细菌耐药性分析[J];江西医药;2006年11期
8 陈永林;赵京;张成林;普天春;李莹;;长臂猿克雷伯氏菌病病原鉴定[J];中国兽药杂志;2007年10期
9 孙翰昌;杨帆;邹莹;;部分环境因子对肺炎克雷伯氏菌和温和气单胞菌生长的影响[J];安徽农业科学;2008年27期
10 李凤汀;刘荣昌;郝正然;汪文燕;杨则瑗;张春莉;;利用~(15)N稀释法研究小麦接种肺炎克雷伯氏菌联合固氮作用[J];微生物学报;1989年03期
11 郑艳;管艺飞;刘长江;;1,3-丙二醇氧化还原酶基因的克隆与序列分析[J];安徽农业科学;2006年12期
12 杨春华;曹际娟;钟毅;石磊;陈庆富;马欣欣;龚斐;;乳及乳制品中肺炎克雷伯氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立[J];微生物学通报;2010年12期
13 朱惠莉,王亚岚,周伊南,龚瑾;产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏菌呼吸道感染的临床分析[J];中国抗生素杂志;2001年03期
14 朱建国;李霜;纪晓俊;胡南;黄和;;1,3-丙二醇氧化还原酶同功酶基因yqhD在肺炎克雷伯氏菌中的表达研究[J];食品与发酵工业;2008年08期
15 张燕,李轻舟,杜连祥,戚薇,陈锦英;肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的提取纯化及其对细胞免疫活性的影响[J];生物工程学报;2005年03期
16 周玉龙;李国军;李阳;王延涛;侯喜林;朴范泽;;奶牛肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定[J];中国奶牛;2007年06期
17 沈菊;胡章立;黎双飞;;肺炎克雷伯氏菌VBNC状态转化突变株的筛选与特性研究[J];水生生物学报;2009年01期
18 袁长芳,周鸿宾,郝家骐;荚膜对肺炎克雷伯氏菌的固氮活性影响的研究[J];微生物学通报;1985年02期
19 张燕;杜连祥;陈锦英;;肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的免疫活性研究[J];天津科技大学学报;2005年04期
20 秦丽;周正;穆燕魁;吴涛;周巍;;PCR检测乳粉中肺炎克雷伯氏菌[J];河北师范大学学报(自然科学版);2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马磊;颜其贵;;竹鼠肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年
2 赵克义;于钦问;陈璐;袁青春;;复方次氯酸钠杀灭肺炎克雷伯氏菌影响因素的试验观察[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
3 贾艳;韩文瑜;杨洋;何礼洋;;肺炎克雷伯氏菌致病机制研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年
4 石蕾;韩文瑜;雷连成;李扬;;猪源肺炎克雷伯氏菌Ⅲ型菌毛的研究及应用[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
5 潘美玉;;肺结核患者医院内感染肺炎克雷伯氏菌的培养与药敏结果分析[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
6 王宝囡;;产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌的检测及耐药性分析[A];2008年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2008年
7 贾艳;韩文瑜;雷连成;杨洋;何礼洋;孙长江;;5株鸡源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
8 辛学俊;陈学荣;沈吉;赵旭;李香娟;杜立峰;陈莉莉;沈丹;王伟平;;本院肺炎克雷伯氏菌临床耐药状况剖析与文献回顾[A];第二届全国药物性损害与安全用药学术会议——抗感染药物不良反应与临床安全应用专题研讨会论文汇编[C];2010年
9 邹立扣;王红宁;曾博;高荣;李旭庭;张安云;周英顺;徐昌文;杨鑫;王霆;张云飞;;用PCR及ERIC-PCR检测猪肺炎克雷伯氏菌耐药基因[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
10 王群思;杨俊梅;杨俊文;崔战菊;;产β-内酰胺谱酶肺炎克雷伯氏菌的体外耐药分析[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 张燕;肺炎克雷伯氏菌荚膜免疫活性物质的研究[D];天津科技大学;2005年
2 贾艳;猪源肺炎克雷伯菌菌毛致病的分子基础及其免疫相关抗原表位的筛选[D];吉林大学;2007年
3 蒋锦;7-不同环胺取代的喹诺酮类化合物的合成与抗菌作用研究[D];中国协和医科大学;2007年
4 李小红;氟喹诺酮类药物结构活性关系研究及里德堡钾原子在激光场中的相干操纵[D];四川大学;2007年
5 魏华;不同外源扰动因素对肠道菌群组成结构影响的研究[D];上海交通大学;2008年
6 陈屏;小叶云实、蒲葵和黄三七的化学成分研究[D];中国协和医科大学;2007年
7 夏涵;新型压电石英DNA传感器微阵列的构建及其在血液感染病原菌快速检测中的应用[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 钟世勋;毛皮动物肺炎克雷伯氏菌分离菌株的系统发育分析及其微胶囊疫苗的研制[D];山东农业大学;2013年
2 曾白华;肺炎克雷伯氏菌的蛋白质组学分析[D];泸州医学院;2012年
3 郑艳;肺炎克雷伯氏菌基因转化技术的研究[D];上海交通大学;2007年
4 李轻舟;肺炎克雷伯氏菌荚膜糖蛋白的制备和免疫调节作用的研究[D];天津科技大学;2004年
5 曾庆南;貉克雷伯氏杆菌病的病原分离鉴定及病理组织学观察[D];吉林大学;2007年
6 李琛;产1,3-丙二醇基因工程菌的构建[D];江南大学;2004年
7 左文朴;Klebsiella pneumoniae甘油脱水酶α亚基Ile498的分子改造[D];广西大学;2008年
8 史一枝;水体三苯基锡的生物吸附与降解研究[D];暨南大学;2009年
9 唐毅;草鱼、白鲢几种细菌性疾病病原的分离及其特性研究[D];西南大学;2008年
10 吴丹丹;草甘膦抗性菌株的筛选、鉴定及抗性基因的克隆[D];华中农业大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 杰洛米·古鲁曼 “科学松鼠会”姚向辉 译;超菌时代[N];南方周末;2008年
2 本报记者 陈昌成;嘉丽士以技术创新提升竞争力[N];中国企业报;2005年
3 张国山;后微波炉时代:技术为王 [N];中华工商时报;2003年
4 记者 王保纯;抗菌羽绒服:告别二次污染[N];光明日报;2006年
5 中国疾病预防控制中心传染病所研究员 张见麟;坂崎肠杆菌专门祸害婴幼儿[N];健康报;2007年
6 一鸣;别再让抗生素毒害孩子[N];大众卫生报;2006年
7 魏开敏;术后预防肺部感染[N];大众卫生报;2007年
8 王 莲;美的:微波炉再启健康题材[N];中国企业报;2005年
9 刘慧清;美的健康家电引导消费潮流[N];科技日报;2005年
10 驻京记者 王乐;公众务必慎重使用抗生素[N];文汇报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978