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内质网应激参与视网膜脱离后细胞凋亡的研究

刘海洋  
【摘要】: 目的检测内质网应激凋亡途径两个不同阶段的标志物GRP78、GADD153在视网膜脱离后不同时期的表达与定位,探讨内质网应激凋亡途径是否参与了视网膜脱离后的细胞凋亡过程。 方法通过向Wistar大鼠左眼视网膜下注射10mg/ml透明质酸钠制造视网膜脱离模型,在脱离后不同时间点摘除眼球制作石蜡病理切片,光镜下行组织学检查;运用先进的荧光TUNEL联合激光共聚焦显微镜检测视网膜的细胞凋亡情况;用半定量RT-PCR检测GRP78、GADD153 mRNA的表达;用Western blot检测GRP78、GADD153蛋白水平的表达;运用免疫荧光联合激光共聚焦显微镜检测GRP78、GADD153在视网膜的表达与分布。 结果组织学检查显示视网膜脱离后,发生了一系列组织病理改变:光感受器外节的缩短与缺失,光感受器细胞、双极细胞、神经节细胞、神经纤维层的变性,Müller细胞纤维的断裂等,其中光感受器细胞数目的减少是最显著的改变。视网膜脱离后8d内出现细胞凋亡现象,高峰在2-4d,主要集中在光感受器细胞层。GRP78 mRNA、GADD153 mRNA在视网膜脱离后1/2d、1d、2d、4d表达显著升高;GRP78蛋白在视网膜全层均可见表达,脱离后1/2d、1d、2d、4d、8d、16d、32d表达显著升高,其中8d、16d、32d表达最高;GADD153蛋白主要在光感受器细胞层可见表达,在脱离后1/2d、1d、2d、4d表达显著升高。GADD153的表达趋势与视网膜光感受器细胞凋亡的趋势相一致。 结论GRP78、GADD153基因与蛋白水平的表达与视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡有关,内质网应激凋亡途径参与了视网膜脱离后光感受器细胞的凋亡过程。


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