利用毕赤酵母表达小C肽人胰岛素原的研究

【摘要】： 胰岛素(Insulin)是临床治疗糖尿病的特效药,具有广阔的应用前景。重组人胰岛素基因曾被成功地在大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的表达,但是存在着难以复性和表达量较低等缺点。毕赤酵母(Pichia pastoris)具有严格调控外源蛋白的表达、加工修饰表达产物、表达量高、营养要求低等优点成为表达外源蛋白的理想表达系统。本研究根据植物偏爱密码子化学合成了小C肽人胰岛素原全基因(B-(H)6LQPK-A),将该小C肽人胰岛素原基因(BC’A)插入到酵母表达载体pPICZαA中,经线性化后,电击法转化毕赤酵母GS115,利用PCR筛选出了阳性转化菌株,从而成功构建了人胰岛素原的毕赤酵母表达体系。阳性菌株经甲醇诱导培养,发酵液上清液经Tricine-SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,发现3株菌株(1#,13#,20#)成功表达了人胰岛素原,同时研究了20#菌株的表达量随时间的变化关系,揭示了His-tag位于C肽时对分离纯化的影响,为进一步研究该基因在P. pastoris和转基因植物中的表达奠定了基础。

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3	卞曙光;陈华新;姜鹏;张海波;刘兆普;秦松;;凡纳滨对虾溶菌酶基因在毕赤酵母中的分泌表达和活性检测[J];水生生物学报;2010年06期
4	丁新丽;汪天虹;;分泌两种木霉纤维素酶的酵母菌株的构建[J];山东商业职业技术学院学报;2006年04期
5	;生物工程学报2006年第22卷总目次[J];生物工程学报;2006年06期
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7	关波;金坚;李华钟;;改良毕赤酵母分泌表达外源蛋白能力的研究进展[J];微生物学报;2011年07期
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14	张仁怀,王海燕,谈宁馨,张风豪,张义正;豆豉溶栓酶基因在毕赤酵母中的表达及其产物的纯化[J];应用与环境生物学报;2005年05期
15	苏彩霞;张萍;顾美荣;金贞姬;付作申;陈尔佳;;重组HBsAg在汉逊酵母中的分泌表达[J];中国生物制品学杂志;2009年02期
16	王莲哲;张现青;李洋;杨广笑;何光源;;毕赤酵母分泌表达SAMS及表达产物活性分析[J];安徽农业科学;2009年10期
17	李永红;饶春明;史新昌;陶磊;袁力勇;王军志;;毕赤酵母表达重组hPK-5蛋白不均一性的鉴定[J];药物生物技术;2008年03期
18	孙金鹏;钱圣一;敬科举;卢英华;;南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究[J];厦门大学学报(自然科学版);2011年04期
19	牛卫宁;谭天伟;;少根根霉(Rhizopus arrhizus)脂肪酶基因在毕赤酵母中的分泌表达[J];生物加工过程;2006年02期
20	谭树华，吴梧桐，刘景晶;在大肠杆菌中分泌表达水蛭素Ⅲ基因的初步研究[J];中国药科大学学报;1999年01期

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10	袁力勇;人纤溶酶原K5在大肠杆菌、毕赤酵母中的表达、纯化与生物学活性研究[D];中国协和医科大学;2001年

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前10条

1	张田;利用毕赤酵母表达小C肽人胰岛素原的研究[D];上海交通大学;2008年
2	李雪莲;超氧化物歧化酶在酿酒酵母中的分泌表达[D];郑州大学;2005年
3	王俊;短小芽胞杆菌脂肪酶在毕赤酵母中的分泌表达[D];华中科技大学;2008年
4	陈俊杰;重组人肝再生增强因子的表达和活性研究[D];沈阳药科大学;2007年
5	魏凡华;猪白细胞介素2的巴斯德毕赤酵母表达及活性测定[D];甘肃农业大学;2006年
6	凡炼炼;人SLPI cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达[D];吉林大学;2006年
7	黄志清;猪干扰素-γ基因在毕赤酵母中的分泌表达及其抗猪瘟病毒活性的研究[D];中国农业大学;2005年
8	吴颖;小C肽人胰岛素原在甲醇酵母（Pichia pastoris）中的分泌表达[D];浙江大学;2005年
9	周磊磊;促血管生成素-2在毕赤酵母中的分泌表达及功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
10	聂海涛;重组人脑钠素在毕赤酵母中的分泌表达[D];吉林大学;2007年

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前10条

1	治;酿酒酵母部分蛋白组图谱公布[N];医药经济报;2002年
2	林一民;我研制出有机磷农药降解酶制剂[N];中国化工报;2006年
3	程洪远;垦中“立体化育人”凸显“立体”[N];海南农垦报;2009年
4	杨玲玲;世界首个重组人血小板生成素获准上市[N];中国医药报;2005年
5	徐铮奎;美国加快开发出新型“保健饮品”[N];中国医药报;2009年
6	周航;生物材料的保藏要求及其是否造成说明书公开不充分[N];中国知识产权报;2011年
7	田立;生命诞生演绎精妙对接[N];大众科技报;2003年
8	;2002年度国家科学技术进步奖(医药类)[N];中国医药报;2003年
9	邵薇译;基因测序的进展[N];北京科技报;2003年
10	记者徐宁　通讯员成群;安琪公司参与制定多项国家标准[N];三峡日报;2008年

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