3种植物饲料添加剂质量标准规范化及作用机制研究

【摘要】：天然植物饲料添加剂具有良好的药理作用、非特异性抗菌作用、有害残留较低、不易产生耐药性、资源丰富、可就地取材等优势。因此,提倡绿色、无公害饲料添加剂来代替抗生素类添加剂,已成为全球发展趋势。但目前本行业普遍存在：天然植物饲料添加剂质量标准缺乏规范化、标准化；作用机制不清楚；加工工艺落后等问题。因此,采取现代分析技术来提升完善植物饲料添加剂质量标准,并从分子水平来研究阐明其作用机制成为本行业亟待解决的技术难题。 本课题针对上海朝翔生物技术有限公司的拳头产品：松树皮、小叶杨、泡桐花饲料添加剂进行质量标准规范化及免疫活性研究,以期为本行业提供良好的示范作用。首先对其主要指标成分进行分离提取,从小叶杨饲料添加剂中分离提取得到水杨苷,从泡桐花饲料添加剂中分离提取得到熊果酸、洋芹素。然后,测定其中主要功能成分(或指标成分)的含量：采用铁盐催化法测定松树皮饲料添加剂中前花青素平均含量为18.96%,采用3,5-二硝基水杨酸比色法进行测定单糖平均含量为26.89%,总糖平均含量为43.99%,并建立了松树皮饲料添加剂HPLC指纹图谱,作为一项重要的定性鉴别依据。采用HPLC法测定,小叶杨饲料添加剂中水杨苷平均含量为13.25 mg/g。泡桐花饲料添加剂中熊果酸平均含量为40.55 mg/g,洋芹素平均含量为0.96 mg/g；最后,结合卫生指标和生理活性成分等指标,分别制定3种植物饲料添加剂的规范化的质量标准,用做企业生产中质量控制标准。 利用小鼠脾淋巴细胞增殖模型和小鼠巨噬细胞吞噬模型分析3种饲料添加剂对小鼠主要免疫细胞作用的影响,然后采用ELISA技术测定免疫细胞中IFN-y、TNF-α、IL-1这3种细胞因子分泌情况。实验结果表明,松树皮饲料添加剂对免疫活性的正向调控作用最为明显,其对脾淋巴细胞向T淋巴细胞分化的作用效果最明显,在浓度为100μg/ml时增殖率达201.13±5.20%；也可以显著的增强小鼠巨噬细胞的吞噬中性红的活性,在浓度为100μg/mL时A值为0.460±0.033(空白对照组为0.316±0.017)；同时能显著增加脾淋巴细胞分泌IFN-γ、巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1的效果。