收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

长江口中华鲟幼鱼鳃丝Na~+,K~+-ATPase基因克隆、表达和酶的定位

封苏娅  
【摘要】:中华鲟为我国特有珍稀物种。迄今为止,国内学者在中华鲟幼鱼渗透调节方面开展了一些积极有益的研究,但这些研究还远不能满足中华鲟保护工作的需求,本论文从基因克隆、表达、离子转运蛋白定位三个方面入手,初步系统地研究了中华鲟幼鱼渗透调节的分子机制。 为了建立鲟鱼的非致死鳃组织取样技术,分别在实验开始和结束时检测活体取样组、对照组及淡水组中鲟鱼生长指标、血清渗透压、离子浓度、鳃丝Na+K+-ATPase(NKA)活性的变化,结果显示,非致死活体取样方法对鲟鱼的生长特性没有显著影响。活体取样实验组和对照组的各项生长指标(体长、全长、体重),血清渗透压、离子浓度、NKA活性均无显著性差异(P0.05),淡水组与盐度10条件下的实验组相比,其生长指标无显著差异,但血清离子、渗透压及NKA活性有显著差异(P0.05)。盐度10条件下活体取样实验组的上述生理指标显著高于淡水组。说明经活体取样的鲟鱼能够正常进行渗透调节。 为了研究盐度10条件下中华鲟幼鱼鳃丝Na+,K+-ATPase(NKA)α亚基的分子调节机制,采用克隆方法得到中华鲟幼鱼鳃丝NKAα亚基部分基因序列,该序列与其他鱼类相同类型的亚基序列比对显示其为较保守的编码区开放阅读框。在鲟鱼转移后3、6、12、24、48、72和96 h检测实验组(淡水-盐水)和对照组(淡水-淡水)中华鲟幼鱼鳃丝NKAα亚基的mRNA表达水平、鳃丝NKA活性、血清Na+、Cl-的浓度和渗透压。结果显示:在转移后0~12 h,实验组中的mRNA表达量与酶活性为适应盐度变化而显著增加(P0.05),离子浓度和渗透压均显著上升(P0.05);在转移后12~24 h,mRNA表达和酶活性开始降低,但仍然显著高于对照组的值(P0.05),离子渗透压的变化与酶活性及mRNA变化趋势一致,这表明中华鲟鳃丝NKA在应对盐度变化时通过改变mRNA表达量来增加酶活性,高活性NKA调节血清离子和渗透压平衡。 为确定中华鲟幼鱼鳃丝Na+,K+-ATPase(NKA)和Na+/K+/2Cl-(NKCC)转运子在组织中分布,通过免疫组织化学的方法检测两种酶的免疫反应。结果显示,NKA广泛分布于鳃丝和鳃小叶上,其中盐度组的NKA免疫阳性细胞数量显著多于淡水组,盐度组细胞的荧光强度大于淡水组。在细胞中除核外,NKA普遍分布在细胞质中;NKCC广泛分布在鳃小叶上,盐度组NKCC免疫阳性细胞数量与淡水组相比无显著差异,但其细胞形态发生变化,盐度组细胞荧光强度增强且单个细胞的荧光区域边缘呈现不规则褶皱,NKCC同样在细胞质中广泛存在,但荧光强度较NKA弱,显示其蛋白的量较少。在相同组织区域的NKA和NKCC分布在不同细胞中。本研究结果表明盐度影响NKA和NKCC的分布。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 宫海军,陈坤明,高永生,赵志光,王锁民,张承烈;不同生境两种生态型芦苇的抗氧化系统(英文)[J];西北植物学报;2004年02期
2 张端阳,梅启明,周培疆,朱英国;马协和红莲型细胞质雄性不育水稻苗期ATPase同工酶分析[J];湖北农业科学;1998年06期
3 刘燕,高荣孚,周晓阳;玻璃化超低温保存中拟南芥幼苗细胞膜ATPase的变化[J];北京林业大学学报;2001年05期
4 周新文,朱国念,孙锦荷;混合重金属离子对鲫鱼(Carassius aruatus)Na/KATPase活性的影响及基因毒性作用研究[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2001年06期
5 张凤瑞;朱嘉倩;陈淑英;刘富林;;小麦幼苗膜结合ATPase动力学参数变化初探[J];河北农业大学学报;1992年04期
6 王雅清,Kalima-N’,KomaMWANGE,崔克明;杜仲次生木质部细胞分化和脱分化过程中ATPase的超微细胞化学定位(英文)[J];植物学报;2000年05期
7 邓德文,陈舜胜,程裕东,袁春红;鲢肌肉在保藏中的生化变化[J];上海水产大学学报;2000年04期
8 陈立松,NOSE Akihiro;菠萝叶片绿色组织与贮水组织液泡膜ATPase和焦磷酸酶特性(英文)[J];植物生理与分子生物学学报;2002年01期
9 宋剑陶,顾增辉;抗冷性不同的大豆品种生理生化差异研究[J];种子;1992年04期
10 孟祥红,王建波,利容千;光敏胞质不育小麦花药发育过程中ATP酶的定位研究[J];作物学报;2000年06期
11 杨雨晗,韩善华,陈维群;烟草类根瘤中ATPase的活性变化及分布特性[J];实验生物学报;2003年04期
12 孔祥会,王桂忠,李少菁,艾春香;低温驯化下锯缘青蟹肝胰腺的抗氧化效应及ATPase活性变化[J];中国水产科学;2005年06期
13 封家旺;李艳飞;金红岩;张金龙;王奔;;维生素E缺乏对雏鸡红细胞膜ATPase活性及唾液酸含量变化的影响[J];中国畜牧杂志;2008年01期
14 高新起,王秀玲;荞麦亲和与不亲和授粉后柱头和花粉管中ATP酶的超微细胞化学定位[J];实验生物学报;2002年01期
15 胡炳义;周琳;杜红阳;刘友良;刘怀攀;;渗透胁迫下大豆幼苗根尖线粒体ATPase活性与结合态多胺含量的关系[J];种子;2008年01期
16 刘杨;康喜亮;杨丽娟;白志川;;水杨酸与高温锻炼对高温胁迫下葡萄叶肉细胞质膜ATPase活性的影响[J];北方园艺;2009年03期
17 林洪金;李金龙;曹言涛;徐世文;;硝酸镧对人工接种vMDV雏鸡红细胞膜ATPase活性的影响[J];东北农业大学学报;2009年10期
18 邵小杰;杨洪强;冉昆;姜倩倩;孙晓莉;;水杨酸对镉胁迫下葡萄根系质膜ATPase和自由基的影响[J];中国农业科学;2010年07期
19 蒋玫;黄世林;伦凤霞;夏培艳;;微小亚历山大藻对黑鲷仔鱼的抗氧化酶和ATPase的胁迫影响[J];海洋通报;2010年04期
20 蒋玫;伦凤霞;夏培艳;黄师林;李磊;;微小亚历山大藻及裸甲藻对黑鲷早期发育影响的比较[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙静文;周卫;梁国庆;王秀斌;;钙对苹果果实钙调蛋白含量和Ca~(2+)—ATPase酶活性及其基因表达的影响[A];中国植物营养与肥料学会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 李妮亚;王瑞刚;孙健;朱慧娟;张云霞;陈少良;;两种非泌盐红树细胞H~+-ATPase与离子区隔化研究[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
3 郭春晓;谢红英;徐瑾;马海燕;郑成淑;;盐胁迫下外源水杨酸对菊花根系离子含量和ATPase及PPase活性的影响[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
4 彭元丽;邹坤;汪鋆值;;紫金砂石油醚部位对H~+,K~+-ATPase作用的研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
5 夏斌;李传慧;陈碧鹃;崔毅;;胜利原油对半滑舌鳎幼鱼肝脏过氧化物酶、溶菌酶和鳃丝Na+-K+-ATPase活性的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
6 陈敏;宋杰;隋娜;范海;王宝山;;NaCl增加了盐地碱蓬愈伤组织质膜H~+-ATPase活性[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
7 江山;许强华;;盐度胁迫对三疣梭子蟹鳃Na~+/K~+-ATPase活力的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
8 励建荣;陆海霞;;秘鲁鱿鱼肌原纤维Ca~(2+)-ATPase稳定性的研究[A];中国食品科学技术学会第七届年会论文摘要集[C];2010年
9 ;Cloning and Characterization of the Genes Encoding V-H+-ATPase Subunits B,C,H From the Halophyte Suaeda comiculata[A];第十二届全国植物基因组学大会论文集[C];2011年
10 孙志芳;李晓泓;莫捷;王婧;何龙;丁娜;王洪彬;张露芬;;力竭游泳大鼠外周皮质酮、肌细胞Na~+-K~+-ATPase活性的变化及逆灸命门穴的干预作用[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 亐开兴;牛亚科ATPase复合体基因的适应性进化及大额牛与婆罗门牛种间杂交的亲子鉴定[D];西北农林科技大学;2013年
2 马秀英;ATPase与杨树耐盐性形成机制研究[D];北京林业大学;2010年
3 林丽娜;AQP4,Kir4.1,Na+,K+-ATPase及NGB在人脑出血灶周表达的实验研究[D];吉林大学;2011年
4 周俊平;HAI-TMIP抗体对人非小细胞肺癌血管内皮细胞作用及其机制的研究[D];第二军医大学;2008年
5 柴成梁;拟南芥类受体蛋白激酶GHR1的结构研究及腾冲嗜热厌氧菌中ECF转运蛋白的ATPase亚基的结构分析[D];中国农业大学;2013年
6 李慧;外源NO供体SNP对小麦幼苗抗旱诱导及作用机理研究[D];河南农业大学;2009年
7 金成官;硅酸盐纳米级微球驱除鲫鱼饲料镉及其载铜后抗病原菌的研究[D];浙江大学;2008年
8 师恺;果菜类蔬菜根系限制下能量代谢变化及其调控机制[D];浙江大学;2007年
9 陆新颜;细胞外ATP对周围神经损伤后脊髓神经元作用及机制的实验研究[D];华中科技大学;2006年
10 张忠兵;以膜转运蛋白为靶点的药物筛选模型的构建与应用研究[D];中国协和医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林钰婷;小菜蛾ATP酶酶学特性及抑制剂研究[D];湖南农业大学;2013年
2 葛玉晴;酸雨胁迫下水稻质膜H~+-ATPase活性变化的分子机制研究[D];江南大学;2013年
3 王颖;盐胁迫和干旱胁迫下胡杨和意大利杨细胞内Ca~(2+)和Ca~(2+)-ATPase水平的变化[D];北京林业大学;2010年
4 郭传龙;黑大豆14-3-3蛋白和质膜H~+-ATPase的表达与互作应答铝胁迫的机理研究[D];昆明理工大学;2013年
5 刘珊;建鲤Na~+-K~+-ATPase α1和β1基因的克隆及盐度对其表达的影响[D];南京农业大学;2011年
6 刘政;ATPase域调节结核分枝杆菌螺旋酶GyrB与GyrA的相互作用[D];华中农业大学;2012年
7 郑诚;抗酸铝种质资源的筛选及细胞质膜H~+-ATPase在植物耐铝机制中的作用[D];浙江大学;2012年
8 陈曦;对比剂对大鼠氧化应激和肾近球小管Na~+,K~+-ATPase活性的影响[D];暨南大学;2010年
9 弓飞龙;甲苯咪唑对黄河鲤抗氧化系统和Na~+-K~+-ATPase活性影响的研究[D];河南农业大学;2009年
10 孙春玲;德氏乳杆菌保加利亚亚种H~+-ATPase弱化菌株的诱变选育及其发酵特性的研究[D];内蒙古农业大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 生医;施一公颜宁研究组在《细胞》发文[N];新清华;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978