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重金属Cd和Cu对泥蚶(Tegillarca granosa)的毒理学效应

陈肖肖  
【摘要】:本文以泥蚶为研究对象,设置了不同浓度Cd2+、Cu2+、(Cd2++Cu2+)处理组,运用酶学分析法研究重金属对其消化酶、抗氧化酶活性的影响,同时建立相关的DNA损伤检测方法,研究了重金属对DNA链的断裂、DNA甲基化水平的影响,以期探讨重金属的致毒机制,确定灵敏可靠的监测指标,实验结果显示: 1对消化酶活性变化的分析 淀粉酶:低浓度组活性前期增强(即被诱导),后期减弱(即被抑制),高浓度组一直处于较低水平,毒性比较,高浓度组低浓度组,Cu2+(Cd2++Cu2+)Cd2+;脂肪酶:活性前期增强,后期减弱,毒性比较,高浓度组低浓度组,(Cd2++Cu2+)Cu2+Cd2+;胃蛋白酶:活性前期增强,呈现升高-降低-再升高-再降低趋势,后期变化较复杂,毒性比较,高浓度组低浓度组,(Cd2++Cu2+)Cu2+Cd2+. 2对抗氧化酶活性变化的分析 内脏团SOD和CAT活性的变化具有相关性,均表现为先升后降的变化趋势,存在明显的时间-剂量效应,可作为重金属离子污染监测的指标,毒性比较,对于SOD而言,(Cd2++Cu2+)Cu2+Cd2+,对于CAT而言,(Cd2++Cu2+)Cu2+.Cd2+. 3单细胞凝胶电泳方法的建立与改良 最佳条件:选择单面磨砂载玻片,采用双层制胶法,正常熔点琼脂糖和低浓度琼脂糖的浓度均为0.7%,胶体的细胞密度为2.1×105cells/mL,解旋30min,采用20ug/mL EB20μL染色,增加梯度乙醇脱水和水洗的步骤,结果显示,该方法的准确度和可靠度较高 4对血细胞DNA损伤的研究 各处理组对血细胞DNA均有显著的损伤作用,随重金属离子浓度的升高,血细胞DNA损伤程度逐渐增加;Cu2+的潜在基因毒性作用大于Cd2+,相对于Cd2+、Cu2+而言,(Cd2++Cu2+)低浓度组的毒性减弱,表现为拮抗效应,而高浓度组的毒性增强,表现为协同效应;同时发现检测指标--TM和OTM响应较灵敏。 5总DNA甲基化水平测定方法(HPLC)的建立 流动相为6%甲醇-5mmol/L戊烷基磺酸钠-0.2%三乙胺pH4,预处理方法为方法4,建立了标准方程,其相关系数、精密度及加标回收率都较高,满足检测的要求。 6对总DNA甲基化水平的影响 各处理组均引起DNA甲基化水平的异常升高,其程度与时间、浓度有关,对鳃影响程度大于足,同一组织中影响程度:高浓度组低浓度组;Cu2+Cd2+;(Cd2++Cu2+)低浓度组中Cu2+和Cd2+表现为拮抗关系,而在高浓度组中为协同关系。


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