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高产率生产L-乳酸拟干酪乳杆菌的高通量选育方法建立及应用

王光耀  
【摘要】:本研究建立了一种高通量快速筛选高产率生产L-乳酸菌株方法。该方法基于溴甲酚绿在不同酸度下颜色不同的原理,使用含有溴甲酚绿的孔板液体培养基,实时观测培养液的颜色变化,筛选高产酸速率突变株。以拟干酪乳杆菌作为出发菌株,结合紫外诱变法和高锰酸钾-溴化钾平板复筛法,成功筛选到一株具有较高产酸速率和一定耐高糖特性的突变株UV16。经摇瓶验证,在含有150g/L葡萄糖的发酵培养基中发酵40h,产L-乳酸112.5g/L,产酸速率为2.81g/L.h。与出发菌株相比,在产酸速率上提高了34.49%,在单位菌体产酸量上提高了20.19%。结合常压室温等离子体诱变法和高锰酸钾-溴化钾平板复筛法,成功筛选出具有较高产酸速率的突变株A6。突变株A6生长速度快,延迟期较短,产酸特性也优于出发菌株。经摇瓶验证,在含有126g/L葡萄糖的发酵培养基中,发酵结束时间为30h,产酸120g/L,糖转化率达95%,产酸速率为4.00g/L·h,相对于出发菌株,在单位菌体产酸量上提高了14.21%,在产酸速率上提高了42.35%。


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