收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺瓦克病毒及病毒分离

向丹丹  
【摘要】:诺瓦克病毒(Noroviruses, NVs)又称诺如病毒或小圆结构病毒(Small round structured virus),是1972年在美国首次发现的新生病毒,直到1995年国内才有报道。NVs是一组世界范围内引起的急性无菌性胃肠炎的重要病原,在全球感染人的非细菌性胃肠炎疾病的病例中超过90%是由该病毒引起的。该病毒是严重危害人类健康的重要食源性病毒,可导致不同年龄阶段人群的急性病毒性腹泻。被NVs感染的食品、水源和NVs感染者排泄物引起的粪口传播是造成NVs感染的主要途径,特点是发病率高、致病剂量低和对外界的抵抗力较强。感染的急性胃肠炎临床主要包括:恶心、呕吐、腹泻、腹痛、发热、厌食等。NVs属于嵌杯状病毒科的诺瓦克病毒属,直径约27-35nm,无囊膜,是单股正链RNA病毒的统称。NVs基因全长约7.7kb,包括3个开放阅读框(open reading frames, ORFs),依次是ORF1、ORF2和ORF3。NVs可分为5个基因群(gene group, GG),分别为GGⅠ、GGⅡ、GGⅢ、GGⅣ和GG V。其中NVGGⅠ、NVGGⅡ和NVGGⅣ主要感染人类,NVGGⅢ感染牛,NVGGⅤ则感染鼠类动物。由于NVGGⅤ只在鼠类动物体内发现,因此又被称之为鼠诺瓦克病毒(Murine noroviruses, MNV)。研究表明,MNV在生物学、遗传学、分子学上的特征都与NVs一样;病毒的大小、形状、浮力密度、基因结构也与NVs很相似。NVs在体外不能增值,而MNV却可以在传代细胞小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞上生长并产生细胞病变,因此MNV成为了NVs的替代病毒进行研究,也是唯一的理想研究模型。MNV在实验动物中广泛传播,几乎所有的实验小鼠对此病毒易感。报道称MNV在粪便中能存留较长一段时间。因此,本研究从上海地区的实验小鼠中采集小鼠粪便或者盲肠内容物进行RT-PCR检测,并在RAW264.7细胞上生长分离得到MNV病毒。 1.为了解实验小鼠自然感染MNV的情况,采集送检的80只实验小鼠的粪便样本,应用RT-PCR方法扩增粪便样本的MNV ORF2特异性基因(187bp, MNV nt5473-5659)片段。对PCR检测为阳性的粪便样本经过10倍体积的PBS稀释以后灌胃到4只ICR小鼠体内,一周以后,将3只ICR小鼠与灌胃的小鼠同居饲养,观察小鼠是否出现异常症状,定期采集粪便做RT-PCR检测,研究小鼠实验感染MNV的情况。一个月以后,处死小鼠,采集粪便、盲肠、十二指肠、脾、肝、大脑、肾、肺、心脏、胸腺、子宫、卵巢和唾液腺等器官做RT-PCR检测,研究MNV的主要感染部位。结果表明:自然感染的阳性率为13.75%(11/80);实验感染的小鼠外表健康、活泼、没有腹泻现象,阳性率为100%;主要的感染部位为小鼠的消化系统。本研究是首次在上海地区实验小鼠粪便中检测到MNV。 2.RAW264.7细胞以5×106细胞/平板的密度培养在60mm的平板上,CO2孵化箱培养24个小时,直到形成80%~90%的单层细胞。将培养液倒掉,500μLPCR阳性结果的粪便悬液接种到RAW264.7单层细胞上。CO2孵化箱培养1个小时后,用无血清的培养基洗脱两次,加10mL含5%的胎牛血清,培养48小时,使用Leica DMI3000显微镜拍照,观察细胞的病变效应。将平板保存在-80℃冻存,24小时后,平板置于室温融解,经过三次冻融以后,3000r/min离心5min,去除细胞碎片,上清液用于提取MNV的RNA,反转录成cDNA,进行PCR。结果表明:目的条带为187bp,与预期的相符。本研究成功的分离培养了MNV病毒。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙国凤;培育剔除实验小鼠的受托服务开始实施[J];生物技术通报;1999年06期
2 张文书,钟欣,邱立明;低湿度对实验小鼠繁殖的影响[J];赣南医学院学报;2003年04期
3 沈杰;郑韧坚;邱巧平;王爱华;童亚男;徐梅倩;常正山;任燕芳;王君芗;张永军;;上海市实验小鼠寄生蠕虫调查[J];上海实验动物科学;1989年04期
4 韦克,潘永全,尹才渊,曹阳,周开源;实验小鼠过渡饲养繁殖管理探讨[J];实验动物科学与管理;1996年02期
5 汤家铭;袁云华;程鸿;;我国实验小鼠群中巨细胞病毒自然感染情况的调查[J];中国病毒学;1992年02期
6 张维;实验小鼠流行性出血热病毒的监测[J];四川动物;1991年01期
7 杨丽娜;王振宇;;红松仁蛋白对实验小鼠血脂代谢的影响[J];东北林业大学学报;2009年06期
8 方肇勤;潘志强;陈晓;卢文丽;付晓伶;侯俐;;实验小鼠四诊方法学的创建和意义[J];上海中医药杂志;2006年07期
9 刘淑霞,刘殿峰,杨淑萍,刘秀霞,马丹,王仁辉,刘占军,高洪喜,薄文学,崔丙春;实验小鼠的净化及监测[J];中国生物制品学杂志;2000年04期
10 肖殿宽;谈如何搞好实验小鼠的生产与供应[J];锦州医学院学报;1998年01期
11 李冠民,关伟红,蔡绵霞,吕峰;环磷酰胺诱导实验小鼠发病的组织病理学观察[J];中国实验动物学杂志;1992年Z1期
12 王谦;张晓娟;;医学实验小鼠品系命名的应用[J];中国卫生标准管理;2019年07期
13 方远书;何忠平;裘颖儿;;实验小鼠的灌胃给药技巧[J];山东畜牧兽医;2014年10期
14 杨红宇,罗玲;数量控制法在实验小鼠繁育中的作用比较[J];贵州畜牧兽医;2003年03期
15 刘雪筠;广州地区实验小鼠隐孢子虫病调查初报[J];北京实验动物科学与管理;1994年01期
16 张瑞忠,鲍世民,金玫蕾;微量细胞毒检测技术及其在实验小鼠遗传监测中的应用[J];上海实验动物科学;1998年Z1期
17 谭毅,赖国旗,曹友德,韦克;等级实验小鼠Peyer氏斑的观察研究[J];中国实验动物学杂志;1999年03期
18 杜颖卉;张艺凡;王书全;;表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位乳酸菌对实验小鼠免疫功能的影响[J];中国农学通报;2020年23期
19 曲平;仇志华;;浅谈实验小鼠非病理性脱毛原因[J];实验动物科学;2014年02期
20 金玫蕾,鲍世民,张瑞忠,赵国际,何新桥,洪慕祁,张雅芳,施美莲;小家鼠和实验小鼠遗传特性的比较研究[J];兽类学报;1992年03期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 黄树武;马磊;闵凡贵;罗银珠;陈梅玲;何丽芳;潘金春;张钰;王静;;中国华南地区实验小鼠感染伪欣氏鲍特菌的调查[A];第十五届中国实验动物科学年会论文集[C];2019年
2 方肇勤;潘志强;陈晓;卢文丽;付晓伶;侯俐;;实验小鼠四诊方法学的创建和意义[A];中国中西医结合学会第五届基础理论研究专业委员会学术研讨会论文集[C];2006年
3 杨雪静;曹俊敏;李俊杰;王原;;茯苓等中药扶植实验小鼠肠道正常菌群生长及其机理的初步研究[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
4 薛慈民;朱琦;徐兆东;;炎列平冲剂对慢性非细菌性前列腺炎实验小鼠的影响观察[A];新编男科理论与临床——中华中医药学会第七届中医男科学术大会;全国中医男科临床与科研方法高级研修班;2006年云南省中医男科诊疗技术培训班讲义与论文集[C];2006年
5 薛慈民;朱琦;徐光东;;炎列平冲剂对慢性非细菌性前列腺炎实验小鼠的影响观察[A];第二次全国中西医结合男科学术会议论文集[C];2003年
6 李广意;曾杰;赵娟;谢思健;;填充剂灌注显示不同实验小鼠脑动脉环的方法[A];中国临床解剖学杂志2013年7月第31卷第4期[C];2013年
7 曹保良;郧淑英;;分组交配用于实验小鼠育种的研究[A];中国实验动物学会第五届学术年会论文汇编[C];2000年
8 吕青;程彦磊;郭莲军;;两种实验小鼠线栓法局灶性脑缺血模型的建立[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年
9 林文庭;洪华荣;;胡萝卜渣膳食纤维对润肠通便作用的研究[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议暨第七届会员代表大会论文摘要汇编[C];2008年
10 吴旧生;;肠道菌群对实验小鼠大肠黏膜CD3,CD4,CD8和CD19分布的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集(下)[C];2012年
11 朱礼华;赵彤言;陆宝麟;;媒介蚊虫对登革病毒感染Balb/C实验小鼠的增强作用的研究[A];昆虫与环境——中国昆虫学会2001年学术年会论文集[C];2001年
12 吴旧生;;肠道菌群变化对实验小鼠肠黏膜sIgA表达的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集(下)[C];2012年
13 杨威;周向梅;赵德明;杨利峰;;病毒对实验小鼠肺脏影响的病理学观察[A];2017年第十五届中国北方实验动物科技年会论文集[C];2017年
14 杨宇丰;;Drosophila models of Parkinson's disease[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
15 魏杰;王洪;巩薇;李芳芳;贺争鸣;岳秉飞;;全国实验动物质检机构酯酶-3测定能力验证评价[A];中国药学会第二届药物检测质量管理学术研讨会资料汇编[C];2015年
16 祝新德;费小茵;陈灵;;灵芝发酵液对实验小鼠抗疲劳作用及毒性的研究[A];动物学专辑——上海市动物学会1997年年会论文集[C];1997年
17 苏林冲;张霞;金月波;何菁;栗占国;;白介素-17在干燥综合征模型小鼠中的作用机制研究[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年
18 方肇勤;潘志强;陈晓;卢文丽;付晓伶;侯俐;;实验小鼠四诊方法学的创建和意义[A];中华中医药学会中药实验药理分会第六届学术会议论文汇编[C];2006年
19 常玲玲;佘锐萍;朱金凤;尤华;田纪景;岳卓;丁叶;;三聚氰胺对实验小鼠小肠黏膜形态结构的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
20 魏杰;王洪;巩薇;于鹏丽;岳秉飞;;实验小鼠血清中酯酶-1的检测能力验证结果评价[A];中国药学会第四届药物检测质量管理学术研讨会资料汇编[C];2017年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 朱晓阳;鼠伤寒沙门氏菌与日本血吸虫共感染小鼠的代谢组学研究[D];中国科学院研究生院(武汉物理与数学研究所);2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前14条
1 向丹丹;RT-PCR检测实验小鼠自然和实验感染鼠诺瓦克病毒及病毒分离[D];东华大学;2013年
2 刘芹;上海地区小鼠诺瓦克病毒的感染状况及病毒的分离和表达[D];复旦大学;2014年
3 田胜男;小鼠诺如病毒检测方法的研究[D];北京协和医学院;2014年
4 赵仙丽;人参配伍陈皮对实验小鼠抗运动性疲劳作用影响的实验研究[D];辽宁中医学院;2004年
5 范勋;实验小鼠体态特征图像识别算法研究[D];南京理工大学;2012年
6 闫锴;血管生成素-2(Angiopoietin-2)调节小鼠下肢缺血血管生成的研究[D];四川医科大学;2015年
7 石梅;思密达对实验性小鼠肠道菌群及免疫功能影响的研究[D];四川农业大学;2007年
8 倪鑫;PBmice实验小鼠基因诱变项目信息系统优化[D];复旦大学;2013年
9 李传应;白芍总苷对实验性慢性湿疹的治疗作用及其部分机制[D];安徽医科大学;2009年
10 陈美周;茶多糖对实验小鼠B16F10细胞瘤治疗与预防效应[D];皖南医学院;2015年
11 张金梁;大承气颗粒抗小鼠急性细菌性腹膜炎作用的研究[D];天津医科大学;2005年
12 郑海琼;特异性敲除肝脏血管紧张素原可以改善β氨基丙腈诱导的小鼠胸主动脉夹层[D];浙江大学;2020年
13 卫飞;不同发酵时段酸肉对实验小鼠血脂的影响研究[D];西南大学;2012年
14 杨勇;蜂蛹抗疲劳及抗缺氧保健功能的实验研究[D];西南农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前17条
1 陈超;实验小鼠可在饲育过程中完成独特进化[N];科技日报;2010年
2 杨茜;清除“有毒”RNA能逆转MMD病程[N];中国医药报;2006年
3 记者 许琦敏;进食时间不恰当更易发胖[N];文汇报;2009年
4 郑灵巧;加强防范诺瓦克病毒危害[N];健康报;2007年
5 保健时报记者 王璐;诺瓦克病毒“钟情”贝类[N];保健时报;2010年
6 李学梅;今冬诺瓦克病毒引起腹泻者增多[N];北京日报;2007年
7 奇云;从诺瓦克病毒看人与自然和谐[N];大众科技报;2007年
8 钱铮;病毒家族的小个子———诺瓦克病毒[N];中国国门时报;2007年
9 李颖);北京未发生诺瓦克病毒传染[N];科技日报;2007年
10 王思海 朱玉 刘奕湛;北京否认出现诺瓦克病毒传染[N];新华每日电讯;2007年
11 ;老人尤须防诺瓦克病毒[N];医药养生保健报;2007年
12 王雪飞;诺瓦克病毒陌生的“熟脸儿”[N];健康报;2006年
13 刘桥斌 实习记者  宋冰冰;带壳海鲜易携诺瓦克病毒[N];健康时报;2006年
14 陈青 通讯员 宋国梵;上海未发现诺瓦克病毒[N];文汇报;2003年
15 陈艳阳;诺瓦克病毒感染 貌似感冒的急性胃肠炎[N];大众卫生报;2007年
16 姜澎;诺瓦克病毒肠胃炎是发达地区常见病[N];文汇报;2003年
17 邓琳;卫生部再发诺瓦克病毒紧急通知[N];北京商报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978