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日本鳗鲡人工繁殖技术优化及雌鳗卵巢发育相关生理生化因子的变化

蒋天宝  
【摘要】:日本鳗鲡(Anguilla japonica)是亚洲最重要的洄游性鱼类之一,也是我国重要的经济鱼类。由于鳗鲡生活史的特殊性,鳗鲡养殖所需的苗种全部依靠天然捕捞来供给,其人工繁殖成为世界难题。近年来,掠夺式的捕捞方式导致了自然界鳗苗资源的严重衰退,因此开展日本鳗鲡人工繁殖相关的研究显得越来越有必要。 本文就目前国内外研究现状,结合近来年最新生活史调查,对日本鳗鲡的人工催熟催产和人工育苗技术的最新进展进行了综述,并探讨了日本鳗鲡人工催熟和催产中的一些关键点。通过设置不同激素类别,不同注射剂量,不同处理针距条件,在人工催熟日本鳗鲡过程中,分别在室内循环系统及基地水泥池养殖环境下,比较分析了各种条件下的催熟和催产应用。观察催熟过程中雌鳗外形特点以及解剖后卵巢形态的变化,通过卵巢组织切片的方法,对日本鳗鲡卵巢发育成熟的全过程进行了组织学研究。用临床医学检验方法,测定分析了雌性日本鳗鲡卵巢发育过程中,血清总蛋白(TP)、血清甘油三脂(TG)、血清胆固醇(TC)、血糖(Glu)、血钙(Ca)和血清无机磷(P)6项生化指标的水平及变化趋势,并与对应的不同卵巢发育阶段的性腺成熟系数(GSI)进行比较分析。测定了不同时期鳗鲡卵巢中氨基酸的组成,比较分析了不同卵巢发育阶段的氨基酸含量及其变化。并对日本鳗鲡胚胎和仔鱼的发育以及形态进行了观察及描述。 研究结果如下:(1)分别注射激素a(0.4mgPT+0.35mgDOM+150IUHCG)/500g BW和激素b (0.75mgPT+150IUHCG)/500g BW,在56-80d时成熟,解剖发现卵巢发育均达第Ⅴ期。恒量注射组和梯度注射组在发育过程中,GSI表现出差异性;但总剂量相同时,在同等时间下能达到同步成熟:在70天时,GSI分别为25.0%和24.8%,没有显著性差异(P0.05)。每周注射组比每两周注射组成熟更早,可以通过调节针距控制最后催产时间。在100-130d期间,雌鳗暂停注射,利用雌体自身内分泌机制,能达到水合作用。相同条件下,雄鳗每周注射激素b,于雌鳗注射后4针时开始,经80-100天后能得到大量精子,能和雌鳗达到同步成熟。(2)84d的注射过程中,实验组的性腺逐渐成熟,GSI显著升高,第12针时达到(46.32±1.75)%;而对照组性腺GSI一直在(2.42±0.18)%。实验组和对照组血清TP水平相对平稳,各组变化无显著差异(P0.05)。实验组和对照组血脂在56d前差异显著(P 0.05):实验组血清TG,TC一直维持较高水平,平均分别为(12.67±2.83)mmol/L和(15.54±3.01)mmol/L;对照组TG和TC一直下降且水平较低,平均分别为(6.33±4.14)mmol/L和(8.53±3.30)mmol/L。实验组和对照组血清Glu均在实验初的较低水平基础上持续上升。相关分析表明,实验组血清TG与GSI水平极显著负相关(r=﹣0.732,n=6,P 0.01)。实验组血清Ca与GSI(r=0.961,n=6,P 0.01),血清P与GSI(r=0.775,n=6,P 0.01)都呈现出极显著的相关性:血清Ca和P在28d后持续上升, GSI逐渐增大。对照组中的血清Ca和P水平则一直维持在一个较低的水平。(3)卵巢中牛磺酸变化差异性显著(P 0.05):实验组牛磺酸浓度不断下降,由Ⅰ、Ⅱ期0.217±0.040mg/100g到Ⅳ、Ⅴ期的0.102±0.045mg/100g;对照组含量基本维持均衡0.204±0.057mg/100g。实验组总氨基酸的含量在Ⅲ期开始上升,在Ⅳ、Ⅴ期时维持同等水平;总必需氨基酸含量的变化情况与总氨基酸含量保持一致,其比例平均为(48.633±0.913)%。Ⅰ、Ⅱ期卵巢中氨基酸含量高依次为GluAsp LysLeu Arg Gly Pro;Ⅲ期为Glu Asp Leu Lys Pro Arg Gly;Ⅳ、Ⅴ期卵巢中氨基酸中含量高依次为GluAspLeu LysArg Gly Val,其组成随性腺发育阶段的不同而有显著差异。对照组停留在Ⅰ、Ⅱ期含量在变化后最后稳定依次为Glu Asp Lys Leu Arg Gly Pro。(4)用半干法获取的受精卵在显微下作了连续的胚胎发育活体观察,发现:在水温(21±0.5)℃条件下,日本鳗鲡从受精卵到仔鱼出膜时间需约38h30min。日本鳗鲡早期仔鱼观察显示与一般硬骨鱼类的仔鱼存在较大差异:无色透明的血细胞和S形心管、开放型的口腔、一定时间存在的感觉丘等结构以及早期肠道有纤毛运动及存在食物等现象等生物学特性。 以上结果表明,日本鳗鲡在人工催熟和催产过程中有一定的特点:激素总剂量相同时,在同等时间下能达到同步成熟;调整针距可以控制最后成熟的时间;雌性日本鳗鲡卵巢发育与其脂类代谢密切相关,无机离子(Ca,P)在此过程中起到重要作用。利用繁殖鱼体营养代谢特点,检测日本鳗鲡血脂或血清Ca和P水平,可能成为为初步判断雌性日本鳗鲡发育情况的新方法;催熟过程中卵巢的氨基酸营养代谢表现出一定规律性,性腺发育可能与氨基酸的代谢有一定相关性,牛磺酸等因子可能为其中的关键。早期仔鳗的结构特点和生物学特性表明其可能存在特殊的摄食方法以及其特殊的环境要求。


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