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海鞘降血脂有效部位的利用技术研究

张建同  
【摘要】:随着人们生活水平的提高,高血脂症发病率高,危害大,降血脂药物或功能食品的需求旺盛,其中多不饱和脂肪酸是降血脂功效成分之一。海鞘是一类典型的海洋污损生物,过度繁殖,严重影响海洋生态环境。国外学者在对其进行抗肿瘤药物的研发中已取得了举世瞩目的成就;海鞘同样是富含多不饱和脂肪酸的重要生物资源,我们前期研究发现,某些海鞘脂溶性提取物具有一定的降血脂活性,因此作为降血脂天然药物或功能食品的新资源,具备较好的开发利用潜力。目前国内外对星座短腹海鞘(Aplidium constellatum)和皱瘤海鞘(Styela plicata)降血脂脂溶性成分的文献报道较少,而且大部分集中在其他活性次级代谢产物的分析上,鲜有对其降血脂活性的研究报道。为了开发降血脂天然药物或功能食品的新资源,本研究在前期研究工作的基础上,开展两种海鞘原料中脂溶性成分的季节变化研究,以及有效部位的提取工艺、质量分析和化学成分背景研究,为将来海鞘降血脂有效部位的产品开发奠定基础。选取富含多不饱和脂肪酸的海鞘优势物种——星座短腹海鞘和皱瘤海鞘为研究对象,利用溶剂低温动态提取的方法对不同时间同一地点及同一时间不同地点采集的海鞘样品的脂溶性成分进行提取,计算提取率并探究脂溶性成分的季节性变化规律,建立原料质量标准。结果表明,随季节的变化,同一地点采集的星座短腹海鞘样品其脂溶性成分提取率有所不同但无明显差异;同一时间不同地点采集的皱瘤海鞘,其脂溶性成分的提取率自北向南呈递增趋势。综合提取率及可采集生物量因素,认为用于提取脂溶性部位的星座短腹海鞘的最佳采集时间为第二、三季度,皱瘤海鞘最佳采样时间为第二季度。采用正交试验法对两种海鞘脂溶性成分的提取工艺进行优化,以提取率、类胡萝卜素的含量2项指标评定方法是否可行。通过正交试验法确定2种海鞘降血脂有效成分的最佳提取条件组合均为A3B3C1,即料液比1:1.5(W/V)、提取时间8min、溶剂配比(正丁醇:乙酸乙酯)1:2(V/V)。最后通过提取验证实验表明:此条件组合是提取2种海鞘脂溶性有效成分的最优条件。采用气相色谱(GC)法、高效液相色谱(HPLC)法对海鞘脂溶性有效成分的质量进行了分析,发现在两种海鞘的上述提取物HPLC分析中,磷脂含量相对较高,达到21.9?51.6%,而EPA+DHA含量低,仅有1.0~5.7%。为了更好地了解海鞘资源的化学物质基础,还对皱瘤海鞘的化学成分进行了初步研究,而前期研究完成的星座短腹海鞘的化学成分可见于文献。通过大孔树脂柱、MCI、硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶等柱层析法及HPLC对皱瘤海鞘提取物进行分离纯化,经质谱、核磁共振等波谱分析法对分离纯化得到的化合物进行结构鉴定。最终从皱瘤海鞘的总提取物中分离鉴定11个化合物,分别为:(1)胆甾-5-烯-3β-醇、(2)4,8-二烯-鞘氨醇-十六碳酸酰胺、(3)胞嘧啶核苷、(4)2'-脱氧尿嘧啶核苷、(5)腺嘌呤核苷、(6)鸟嘌呤核苷、(7)2’-脱氧胸腺嘧啶核苷、(8)3-(2-磺基乙基氨基)-癸-7-烯酸、(9)色氨酸、(10)2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-3-甲酸、(11)对羟基苯乙胺,其他化合物的结构正在分析中。通过此次研究,为后续开展降血脂功效评价、安全性评价提供了主要成分明确、其它成分背景清晰的提取部位原料,有望最终为心血管疾病的治疗提供一种新的天然药物或新的功能食品生物资源,同时也使海鞘这一污损生物有望实现变废为宝。


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