收藏本站
收藏 | 论文排版

花鲈白细胞介素17家族及其受体的克隆与鉴定

宛帅  
【摘要】:花鲈(Lateolabrax maculatus)隶属鲈形目(Perciforms)、鮨科(Servanidae)。白细胞介素17(IL-17)家族是一种细胞因子,他们为一类小分子分泌蛋白,通过与受体特异性结合调控细胞内一系列反应,在先天性免疫和适应性免疫中都起到了重要的作用。本研究中鉴定了花鲈IL-17家族的4个配体(IL-17A/F1、IL-17B、IL-17C、IL-17D)及1个受体(IL-17RB),并应用生物信息学方法分析了他们的分子结构。通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)的方法,分析了5个基因在健康花鲈各组织中的表达情况;分析了爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)感染花鲈后,相关免疫组织(鳃、头肾和脾脏)中5个基因的表达情况;分析了脂多糖(LPS)/聚肌苷酸-聚胞苷酸(poly I:C)刺激花鲈后,对5个基因表达的影响。构建了原核表达载体,获得了花鲈IL-17B及IL-17RB重组蛋白。结果如下:(1)通过克隆获得了花鲈4个IL-17配体及1个IL-17受体c DNA全长。序列分析显示,4个IL-17配体除了IL-17C,预测都有一个信号肽。每个IL-17配体都有4个可形成二硫键的保守半胱氨酸。1个IL-17受体(IL-17RB)也预测出有一个信号肽。IL-17RB为单次跨膜蛋白。(2)通过qRT-PCR分析发现花鲈各个基因在不同的组织中表达水平不同。在健康花鲈鳃、头肾、后肠、脾脏、肝、脑、皮肤和肌肉这8种组织中,都检测到了它们的表达。IL-17A/F1基因在鳃中表达量最高,在肌肉中表达量最低;IL-17B基因在鳃中表达量最高,在肝中表达量最低;IL-17C基因在肌肉中表达量最高,在头肾中表达量最低;IL-17D基因在脑中表达量最高,在肌肉中表达量最低;IL-17RB基因在鳃中表达量最高,在肠中表达量最低。鳃是鱼类抵御病原体入侵的第一道防线,是鱼重要的黏膜免疫器官,大多数IL-17基因在鳃中的高表达表明了它们在黏膜免疫中起了重要作用。IL-17RB与IL-17B基因在各个组织中的表达水平相似,可能与它们的特异性结合有关。(3)qRT-PCR表明,在分别注射LPS、poly(I:C)和爱德华氏菌12h后,花鲈鳃中的IL-17A/F1基因表达量极显著下调,IL-17A/F1基因在每种鱼中表达水平都不同,差异较大,很难分辨出它的具体作用;在分别注射LPS、poly(I:C)和爱德华氏菌6h后,头肾中的IL-17B基因表达量显著上调,表明IL-17B在病原体入侵时迅速反应;在注射LPS的6 h后,头肾中IL-17C表达上调6倍,推测IL-17C可能在炎症初期发挥独特的作用;在注射LPS、poly(I:C)和爱德华氏菌48h后,头肾中的IL-17D显著上调,表明了IL-17D参与炎症反应。在注射爱德华氏菌6h后,头肾中的IL-17RB基因表达量显著上调,这个结果与IL-17B一致。(4)分别构建了花鲈IL-17B及IL-17RB的重组质粒,经过大量诱导后获得了IL-17B及IL-17RB的重组蛋白,并把重组蛋白并进行了纯化,SDS-PAGE显示重组蛋白大小和预测结果一致,为下一步功能实验奠定基础。上述结果表明:花鲈IL-17家族配体及其受体对LPS、poly(I:C)和爱德华氏菌刺激的反应各不相同,表现出不同程度的表达变化,暗示它们在病原体入侵时在免疫系统中发挥了不同的作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 马燕梅;林树根;王全溪;潘三东;;花鲈头肾的显微结构和超显微结构[J];福建农林大学学报(自然科学版);2008年02期
2 彭彪彪;赵峰;王思凯;张涛;杨刚;苗中博;庄平;;中国花鲈在长江口不同亚生境中的栖息特征[J];南方水产科学;2021年04期
3 虞为;吴进喜;林黑着;文国樑;曹煜成;黄小林;黄忠;杨育凯;李涛;赵旺;;丁香酚对花鲈幼鱼的麻醉效果[J];河北渔业;2020年04期
4 苏友禄;李勇;王宝屯;李望东;罗志平;古群红;;养殖花鲈病毒和寄生虫性疾病鉴别与控制[J];水产养殖;2020年08期
5 区又君;;花鲈的人工繁育[J];海洋与渔业;2008年10期
6 农影;;花鲈养殖效益高[J];致富天地;2017年05期
7 赵玄多;徐素慧;杨雯昱;高洋;修云芳;陈玉村;陈德坤;;小熊猫IL-17的克隆及原核表达[J];动物医学进展;2014年06期
8 贺洁;熊文;邵庆均;;不同水平饲料磷对花鲈生长和体成分的影响[J];科学养鱼;2009年09期
9 林意斌;薛阿民;;花鲈养殖技术[J];河北渔业;2008年01期
10 冯晓宇;郭水荣;李行先;吴国荣;马柏林;;花鲈淡水池塘高效规模养殖试验[J];内陆水产;2008年03期
11 苏传福;花鲈的营养需求研究进展[J];北京水产;2005年04期
12 苏传福;花鲈营养需求的研究进展[J];饲料研究;2005年11期
13 陈文忠,赵国翠;花鲈鱼苗淡化及驯化技术的研究[J];科技情报开发与经济;2004年01期
14 丁雷,刘柱石,宋锦;花鲈的生物学及淡化养殖技术[J];水产养殖;2003年03期
15 沈庭栋;花鲈淡水养殖技术[J];北京农业;2002年06期
16 赵文翰;花鲈淡水养殖技术要点[J];北京水产;2002年05期
17 李明云;花鲈工厂化育苗技术[J];中国动物保健;2000年12期
18 廖国璋;花鲈的池塘养殖[J];广东科技;1998年11期
19 刘红,汲长海,施正峰,肖雨,戴祥庆;花鲈对饲料的选择性和嗜好[J];水产学报;1999年01期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 李明云;苗亮;陈莹莹;侯红红;陈炯;;香鱼白细胞介素17(IL-17)基因克隆及鳗利斯顿氏菌胁迫后的表达变化[A];浙江省第四届动物学博士与教授论坛、动物学与经济强省-浙江省动物学研究及发展战略研讨会论文摘要集[C];2017年
2 薛良义;韦家永;;花鲈皮肤溃疡病抗病性状的RAPD标记筛选[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
3 王兰梅;薛敏;吴秀峰;郑银桦;王嘉;;铜源及不同基础饲料对花鲈生长、铜蓄积量及免疫抗氧化功能的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4 胡鹏莉;张春晓;鲁康乐;宋凯;王玲;;饲料磷与脂肪水平对花鲈生长、脂肪酸组成及脂代谢的影响[A];2018年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2018年
5 李嫦嫦;董琳;;IL-23、IL-17在RSV感染气道粘液高分泌中的调控作用及罗格列酮的抑制效应[A];2018年浙江省医学会儿科学分会学术年会论文汇编[C];2018年
6 刘青;;双歧杆菌四联活菌片联合用药对小儿非感染性腹泻的疗效及血清中IL-6、IL-17表达影响研究[A];《临床心身疾病杂志》2015年12月研讨会综合刊[C];2015年
7 和燕;施京红;胥冰;张丽君;彭玉琴;刘文奇;;细胞因子IL-17在结肠癌中的研究进展[A];第十届全国免疫学学术大会汇编[C];2015年
8 唐卫星;殷维;郭立;秦海明;金斌松;吴千红;李博;傅萃长;;西北太平洋近海鱼类中国花鲈呈现空间遗传同质性[A];中国鱼类学会2008学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
9 葛颂;;对小鼠心脏移植急性排斥反应中IL-17作用的研究[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年
10 杨小军;潭琰;邹开芳;钱伟;侯晓华;;IL-17与溃疡性结肠炎炎症程度相关性的临床研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
11 刘金殿;李喜莲;杨元杰;顾志敏;;中国花鲈富阳群体与桐庐群体遗传变异分析[A];第二届现代化海洋牧场国际学术研讨会、中国水产学会渔业资源与环境专业委员会2018年学术年会论文集[C];2018年
12 刘金殿;;中国花鲈富阳群体与桐庐群体遗传变异分析[A];2018年(第十三届)浙江渔业科技论坛论文摘要集[C];2018年
13 林响;吕力为;;IL-17在小鼠干燥综合症发病中的作用及机制研究[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年
14 刘玲玲;秦文卿;黄媛;马迪;刘兴楼;李革;舒赛男;方峰;;巨细胞病毒性肝炎与炎性因子IL-17关系初探[A];第十届全国儿童消化系统疾病学术会议论文汇编[C];2014年
15 招雪晴;沈雨;苑兆和;;石榴UFGT基因克隆与表达特征[A];中国石榴研究进展(四)[C];2022年
16 李英娇;陈艺杰;周贺;李江红;缪晓青;;中华蜜蜂Takeout(AcTO1)基因的克隆和表达分析[A];2021年中国(广西梧州)蜂业博览会暨全国蜂产品市场信息交流会论文集(下册)[C];2021年
17 韦吉;王荟洁;王洪洋;;马铃薯抗晚疫病基因克隆策略研究进展[A];植物病理科技创新与绿色防控——中国植物病理学会2021年学术年会论文集[C];2021年
18 董捷;韩蕾;王烨;黄家兴;吴杰;;兰州熊蜂磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)基因克隆及其表达分析[A];二十一世纪第二届全国蜂业科技与蜂产业发展大会论文集摘要[C];2016年
19 刘雨露;胡方觊;王华广;毛忠贵;唐蕾;;一种新型木聚糖酶的基因克隆表达及酶学性质研究[A];中国生物工程学会第十届学术年会暨2016年全国生物技术大会论文集[C];2016年
20 刘文俊;黄运茂;黄植霞;邱金辉;;鹅PKR基因的克隆及其组织表达差异性研究[A];中国畜牧兽医学会2017年学术年会论文集[C];2017年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 梁晓芳;花鲈味觉受体第一家族在摄食调控中的作用机制研究[D];中国农业科学院;2019年
2 刘宇航;海藻糖对阿尔兹海默症中APP代谢的分子机制研究及IL-17对人偏肺病毒感染中免疫细胞表达失衡的影响机制[D];重庆医科大学;2018年
3 王国良;IL-17在骨关节炎中的表达及引起炎症反应的机制[D];山东大学;2018年
4 周旭;黄颡鱼感染鲇爱德华氏菌后的动态炎症反应以及IL-17家族基因的功能研究[D];华中农业大学;2022年
5 马翔宇;白细胞介素-17(IL-17)正向调节星形胶质细胞IL-6正反馈表达及其调控机理的研究[D];山东大学;2010年
6 王道;不同倍性鱼HPG轴生殖基因的表达及性别决定的机制研究[D];湖南师范大学;2013年
7 郑凌予;林木谷氨酸脱羧酶(GAD)基因克隆及其催化产物GABA的调控功能[D];中国林业科学研究院;2015年
8 梁晓芳;花鲈利用鱼粉和植物蛋白源的选择性摄食调控机制研究[D];中国农业科学院;2017年
9 李瑛;IL-17细胞因子与肺腺癌发生相关机制的研究[D];哈尔滨医科大学;2011年
10 双莲;IL-17基因多态性和环境因素与冠心病易感性的相关性研究[D];南方医科大学;2016年
11 熊浩飞;IL-17在根尖周炎中的表达及作用研究[D];武汉大学;2010年
12 刘建昆;IL-17在结直肠癌血管生成中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2011年
13 马守宝;IL-17对肝细胞肝癌的促进作用及机制研究[D];苏州大学;2014年
14 冯守明;大菱鲆粘膜及淋巴细胞对迟缓爱德华氏菌免疫应答的研究[D];中国海洋大学;2008年
15 焦绪栋;迟缓爱德华氏菌基因工程疫苗的构建及免疫效果的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
16 李墨非;海水鱼类病原菌迟缓爱德华氏菌和海豚链球菌的致病机制[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2015年
17 周泽军;迟缓爱德华氏菌免疫逃逸机制研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
18 刘歆春;IL-17在大鼠肝移植急性排斥反应模型中的表达及作用研究[D];中南大学;2011年
19 陈曦;IL-17对NSCLC淋巴管生成及其预后影响的实验研究[D];第三军医大学;2010年
20 杨冠骅;迟缓爱德华氏菌功能基因组和条件必需基因的筛选[D];华东理工大学;2018年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 宛帅;花鲈白细胞介素17家族及其受体的克隆与鉴定[D];上海海洋大学;2021年
2 吴桂玲;几种免疫增强剂对花鲈非特异性免疫力的影响及免疫疲劳初探[D];中国海洋大学;2007年
3 黄张帆;三种多糖对花鲈生长及脂代谢的影响[D];集美大学;2021年
4 胡敏春;五种外源酶制剂在花鲈饲料中的应用研究[D];华南农业大学;2018年
5 孙永旭;替普瑞酮对花鲈肠道缺氧应激的损伤防护研究[D];上海海洋大学;2019年
6 李国明;谷胱甘肽对花鲈幼鱼生长、抗氧化和肠道健康的影响[D];上海海洋大学;2019年
7 张玉晗;花鲈生态冰温无水活运技术的研究[D];上海海洋大学;2019年
8 胡鹏莉;饲料钙磷水平对花鲈生长、钙磷消化吸收和沉积的影响[D];集美大学;2019年
9 李潇;高温环境下饲料维生素C对花鲈幼鱼生长性能、生理生化指标及肝脏组织结构的影响[D];集美大学;2019年
10 黄皓琰;N-氨甲酰谷氨酸在花鲈饲料中的有效性和耐受评价及其调控营养代谢的机制研究[D];中国农业科学院;2019年
11 张颖;植物蛋白替代饲料鱼粉对花鲈营养代谢和肝脏健康的影响[D];东北农业大学;2019年
12 高瞻;几种环保型添加剂对花鲈生长、消化及免疫性能的影响[D];集美大学;2016年
13 徐安乐;三种中草药对花鲈诱食生长、非特异性免疫及消化酶活性的影响[D];集美大学;2016年
14 王晨颖;复方中草药和果寡糖对花鲈生长和免疫的影响[D];集美大学;2015年
15 王家奇;花鲈简化基因组和转录组测序及基因表达分析[D];上海海洋大学;2018年
16 张树威;饲料磷水平对淡水养殖花鲈生长、体组成及脂代谢的影响[D];集美大学;2018年
17 吴瑞;复合蛋白KT67替代鱼粉对花鲈生长、消化和肠道健康的影响[D];集美大学;2018年
18 蔡荣;小球藻醇提取物对花鲈幼鱼生长作用及机理的初步研究[D];湖南农业大学;2017年
19 王亚如;豆粕替代鱼粉对花鲈生长性能和肠道健康的影响[D];集美大学;2017年
20 洪巧巧;长江口中国花鲈的食性及分子生物学在食性分析上的应用[D];华东理工大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 张晴丹;解开花鲈的基因密码[N];中国科学报;2019年
2 记者 王敏 通讯员 任万帅;小花鲈闯出大市场[N];东营日报;2018年
3 汪智杰 孙加顺;威海花鲈良种场通过省级验收[N];中国特产报;2001年
4 本报记者 张双虎;未雨绸缪待花开[N];科学时报;2011年
5 记者 钱海红;ITP 代谢基因克隆成功[N];健康报;2001年
6 YMG全媒体记者 黄钰峰 李伟嘉;30万尾优质花鲈苗种培育成功通过验收[N];烟台日报;2021年
7 记者 谢军;SARS病毒基因克隆、蛋白质表达等取得最新进展[N];光明日报;2003年
8 记者 黄辛;爱德华氏菌—宿主互作新机制获揭示[N];中国科学报;2019年
9 记者谢卫群;中国完成SARS病毒主要基因克隆和蛋白表达[N];人民日报海外版;2003年
10 记者 陆威 实习生 李冠宏;水产部门向廉州湾投放120万尾花鲈苗[N];北海日报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978