收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于LSEC对HSC的作用解析扶正化瘀方化学成分F-03抗肝纤维化效应机制

嵇强  
【摘要】:背景和目的:课题组前期研究发现扶正化瘀方(Fuzheng Huayu,FZHY)可有效抑制肝纤维化,减少病理性血管新生的生成。基于四段式药物主要化学成分的筛选发现,F-01、F-02和F-03在提取物、门静脉、肝脏和全身血中暴露量居于前列。基于上述结果,本研究对FZHY方主要化学成分F-01、F-02和F-03在抑制肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,LSEC)去分化和肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化中的作用进行比较评价,筛选出抑制LSEC去分化的化学成分F-03,并进一步解析了 F-03通过抑制LSEC去分化,及其通过抑制LSEC去分化从而抑制HSC活化,发挥抗肝纤维化的效应机制。方法:1、FZHY方化学成分F-01、F-02和F-03对LSEC去分化的影响:分别给予FZHY方及其化学成分F-01、F-02和F-03干预人肝窦内皮细胞(human hepatic sinusoidal endothelial cell,HHSEC)、AML12、L02 细胞 24h 后,采用 CCK8 法检测细胞增殖情况;应用100μM CoCl2诱导HHSEC去分化,同时分别给予FZHY 方及其化学成分 F-01、F-02 和 F-03 干预 24h 后,RT-PCR 及 Western blot法检测 HHSEC 和小鼠肝窦内皮细胞(mouse primary liver sinusoidal endothelial cell,MP-LSEC)去分化指标(CD31和CD44)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法检测CD44和趋化因子受体4(c-x-c chemokine receptor4,CXCR4)的荧光表达。2、FZHY方化学成分F-01、F-02和F-03对HSC活化的影响:采用TGF-β15ng/ml诱导LX-2和JS1细胞活化,分别给予FZHY方及其化学成分F-01、F-02和F-03干预24 h后,RT-PCR及Western blot法检测LX-2和JS1细胞活化指标(α-SMA和COL-Ⅰ)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法检测α-SMA和COL-Ⅰ荧光表达。3、HHSEC-LX-2共培养体系,观测F-02与F-03在抑制HHSEC去分化和通过抑制HHSEC去分化影响LX-2活化的药效学差异:RT-PCR检测CD31、CD44、α-SMA和COL-Ⅰ的mRNA表达水平,免疫荧光法检测α-SMA和COL-Ⅰ荧光表达。4、HHSEC-LX-2共培养体系,观测F-03抑制HHSEC去分化作用,及其通过抑制HHSEC去分化影响HSC活化的作用:采用100 CoCl2诱导HHSEC去分化,分别给予F-03、YC-1、AMD3100、sh-CXCR4基因沉默和STI 571干预,RT-PCR 和 Western blot检测CD31、CD44 和 HIF-1α/CXCR4/PDGF/CXCR7 信号通路指标(HIF-1α、SDF-1、CXCR4、PDGF、PDGFβR、CXCR7)以及 LX-2 细胞增殖活化指标(PDGFβR、α-SMA和COL-Ⅰ)的mRNA和蛋白表达,免疫荧光法检测α-SMA和COL-Ⅰ的荧光表达。5、F-03实验动物模型抗肝纤维化作用的观测:①采用50%CCl4-橄榄油溶液1 ml/kg体重皮下注射制备大鼠肝纤维化模型,每周2次;第7周开始,给予F-03干预,以FZHY和索拉菲尼为阳性对照,9周末,处死取材。正常组、模型组给予相应量0.3%CMC-Na灌胃。②BDL大鼠肝纤维化模型,随机分为3组,分别为假手术组、模型组和F-03药物组,于造模第二周开始给予F-03干预,4周末处死取材。观察并记录大鼠一般情况,包括体重、肝重、脾重、肝体比、脾体比变化;③检测血清ALT、AST和GGT;用苏木精-伊红(HE)染色法检测肝组织炎症改变;天狼猩红(SR)染色检测肝组织胶原纤维,并进行胶原纤维面积比半定量分析;碱水解法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量;RT-PCR和Western blot 检测肝组织 α-SMA、COL-Ⅰ、CD31、CD44、CXCR4、CXCR7 和PDGF的mRNA和蛋白表达;免疫组化法检测肝组织α-SMA、COL-Ⅰ和CD31的表达。结果:1、FZHY方及其化学成分F-01、F-02和F-03均可显著抑制HHSEC细胞和MP-LSEC细胞去分化,其中在FZHY方以25μg/ml浓度效果最为显著,F-01以50 μM浓度效果最佳,F-02以10 μM浓度效果最佳,F-03以2 μM浓度最佳。2、FZHY方及其化学成分F-01、F-02和F-03均可显著抑制LX-2细胞和JS1细胞活化,其中在FZHY方以25 μg/ml浓度效果最佳,F-01以5 μM浓度效果最佳,F-02以10 μM浓度效果最佳,F-03以2μM浓度效果最佳。3、在HHSEC-LX-2共培养体系中,与正常对照组相比,模型组Transwell下室中HHSEC细胞CD31 mRNA表达显著升高,CD44 mRNA表达显著降低;Transwell上室中LX-2细胞α-SMA和COL-Ⅰ mRNA表达显著升高。与模型组相比,10 μMF-02和2μMF-03均可显著降低去分化HHSEC细胞CD31 mRNA表达,显著提高CD44 mRNA的表达;相比,2μM F-03 CD31 mRNA表达量显著低于与10 μMF-02(P0.05)。10 μM F-02和2 μMF-03均可显著降低活化LX-2细胞COL-Ⅰ mRNA表达,但2μM F-03表达量显著低于10 μM F-02(P0.05);2μMF-03 可显著降低 α-SMA mRNA 表达。4、在HHSEC-LX-2共培养体系中,与正常对照组相比,模型组Transwell下室中HHSEC细胞CD31、HIF-1α、CXCR4和PDGF mRNA表达显著升高,CD44和CXCR7 mRNA表达显著降低;Transwell上室中LX-2细胞α-SMA、COL-Ⅰ和PDGFβR mRNA表达显著升高。与模型组相比,给予2μM F-03干预后,Transwell 下室中 HHSEC 细胞 CD31、HIF-1α、CXCR4 和 PDGF mRNA 表达显著降低,CD44和CXCR7 mRNA表达显著升高;Transwell上室中LX-2细胞α-SMA、COL-Ⅰ和PDGFβR mRNA表达显著降低,效果与阳性对照YC-1、AMD3100和sh-CXCR4基因沉默、STI 571干预相比,无显著性差异。且单用F-03和F-03分别与AMD3100、sh-CXCR4、STI 571二者联用间无显著性差异。5、在CCl4和BDL大鼠肝纤维化模型中,与正常对照组相比,模型组血清ALT、AST、GGT活性显著升高;病理染色可见肝细胞坏死,炎细胞浸润,胶原纤维增生,纤维间隔形成;Hyp含量及天狼星红染色半定量显著升高,肝纤维化相关指标α-SMA、COL-Ⅰ mRNA和蛋白表达显著增加;肝脏血管新生指标CD31、CXCR4和PDGF表达显著升高,CD44和CXCR7表达显著降低。与模型组相比,F-03能显著降低血清ALT和AST水平,减少肝组织炎性细胞浸润;F-03可显著降低α-SMA和COL-Ⅰ的表达,降低Hyp含量,减少胶原沉积;显著降低肝组织CD31、CXCR4和PDGF的表达,显著增加CD44和CXCR7的表达。结论:1、LSEC的HIF-1α表达上调后促进CXCR4的表达,高表达的CXCR4可促进PDGF表达及分泌,PDGF一方面与HHSEC上的受体PDGFβR结合抑制CXCR7的表达进而促进HHSEC去分化;另一方面HHSEC分泌的PDGF与HSC上的PDGFβR 结合后促进 HSC 活化。提示 HIF-1α/CXCR4/PDGF/PDGFβR/CXCR7 轴在LSEC去分化及LSEC与HSC相互关系中具有重要的作用,为抗肝纤维化提供了新靶标通路。2、F-03具有良好的抗肝纤维化的作用,可显著减轻炎症反应、抑制胶原沉积和LSEC去分化,其作用机制与调控CXCR4/PDGF/CXCR7轴有关。3、F-03通过抑制HIF-1α/SDF-1/CXCR4信号活性进而抑制PDGF的表达,促进CXCR7的表达从而抑制LSEC去分化;且F-03通过抑制LSEC分泌PDGF,进一步减少PDGF与HSC上PDGFβR的结合,从而抑制HSC活化。此研究发现为FZHY方的临床应用发展以及进一步研发抗肝纤维化新药提供了部分科学依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 于世瀛,王健,河福金,李彧,白锦文,赵福建,赵丽云,牛建昭,王继峰;益气活血方药抑制大鼠HSC体外增殖作用的实验研究[J];北京中医药大学学报;2003年06期
2 蒋明德,甘新宇,解方为,曾维政,吴晓玲;乙醛对大鼠HSC增殖以及胶原基因表达影响的实验研究[J];西南国防医药;2002年02期
3 李长秦;季金文;郑旭锐;王礼凤;孙守才;宋健;王小平;肖新春;;加味四逆散含药血清对HSC凋亡影响的实验研究[J];辽宁中医杂志;2012年09期
4 谭友文;吴建成;;IL-18及IL-18抗体抗免疫性肝纤维化药血清对离体小鼠HSC增殖和凋亡的影响[J];江苏医药;2011年17期
5 刘冬梅;;为了学生而存在——对澳大利亚新南威尔士州HSC历史课程标准的评析[J];历史教学(中学版);2007年08期
6 许桂清;张军朋;;澳大利亚HSC考试对物理学史的考查及启示[J];物理教学;2013年03期
7 刘峰林;黄焰;;肝病二号合剂对肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡及相关蛋白表达的影响[J];中国医药指南;2013年01期
8 谢强;陈超;梁疆岭;韩春雨;刘建桥;;HSC型保温涂料在油田注汽锅炉应用效果分析[J];中国石油和化工标准与质量;2011年06期
9 马全伟;;高速切削(HSC)技术、装备及应用初探[J];大众科技;2006年03期
10 李伟;;高强混凝土(HSC)在建筑施工中的应用[J];山西建筑;2014年27期
11 陈敏;;高强混凝土(HSC)的性能与展望[J];山西建筑;2009年16期
12 宋文华;于洁;王琛;周隧新;;斑马纸(HSC)常见故障与分析[J];科技创业月刊;2005年12期
13 余静;姚立;;肝星状细胞(HSC)凋亡机制研究进展[J];亚太传统医药;2009年10期
14 胡静;王洪武;;肝纤维化中HSC调控与基质降解的靶向RNA干扰实验研究进展[J];现代免疫学;2019年04期
15 侯丽颖;季幸姝;吕志平;贺松其;文彬;蔡红兵;;重组瘦素诱导HSC增殖及保肝宁调控作用的实验研究[J];现代医药卫生;2008年13期
16 刘真;蒋天伦;范娅涵;赵树铭;黎儒青;;猪造血微环境体外模型对人HSC分化作用的实验研究[J];第三军医大学学报;2006年23期
17 李迎春,郭子荣,罗传浩,蒙大庆;用HSC法与稳定性参数分析杂交油菜的丰产稳产性[J];西南农业学报;2003年02期
18 雷娜;马进;郑仕中;陆茵;王爱云;;盐酸川芎嗪影响HSC增殖的作用机制研究[J];南京中医药大学学报;2010年03期
19 杨杰;用HSC法估算小麦新品种的高产稳产性[J];安徽农业科学;1998年03期
20 左秀萍;;澳大利亚新南威尔士州HSC地理考试评析——以2015年HSC地理考试为例[J];地理教学;2016年22期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 谭焱;吕志平;;保肝宁对转录因子29在HSC中的调节作用[A];全国中西医结合基础理论学术研讨会论文集[C];2004年
2 张晶;平键;徐列明;;白藜芦醇通过诱导自噬抑制HSC活化的机制研究[A];第二十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2014年
3 陈万军;;高速切削(HSC)技术、装备及应用初探[A];河南省土木建筑学会2008年学术交流会论文集[C];2008年
4 李四军;翟建华;熊杨东;;破碎围岩HSC特种水泥固结灌浆试验[A];地基基础工程与锚固注浆技术:2009年地基基础工程与锚固注浆技术研讨会论文集[C];2009年
5 李俊;;肝纤维化恢复期TRAIL对HSC凋亡的调控作用及其HSC内信号转导机制研究[A];全国生化与分子药理学药物靶点研讨会论文摘要集[C];2008年
6 张晶;平键;徐列明;;丹参酚酸B通过抑制自噬抑制HSC活化[A];第二十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2014年
7 王玉珍;姜慧卿;;法舒地尔通过肌球蛋白轻链磷酸化途径抑制HSC的迁移与黏附[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
8 叶国荣;舒建昌;;肝星状细胞在肝纤维化中的作用[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年
9 朱丹丹;陈金铃;王建新;段义农;;日本血吸虫可溶性虫卵抗原SEA诱导HSC凋亡的分子机制研究[A];中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集[C];2016年
10 黄强;;肝纤维化与肝星状细胞关系的研究进展[A];浙江省中医药学会肝病专业委员会2009年学术年会暨肝病新进展继续教育学习班论文汇编[C];2009年
11 王要军;谢渭芬;张新;;调控细胞外信号调节激酶-1对肝星状细胞功能的影响[A];中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2008年
12 陈永平;;肝纤维化肝星状细胞信号调节及干预的研究进展[A];2005年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2005年
13 潘陈为;金玲湘;;肝纤维化肝星状细胞信号调节及干预的研究进展[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年
14 杨莉;吕航宇;刘玉珍;侯军良;戴二黑;;软肝化坚颗粒调节HSC细胞分泌胶原及相关细胞因子的研究[A];中华中医药学会第十五届内科肝胆病学术会议暨国家中医药管理局专科专病协作组(肝病组、传染病组)会议论文汇编[C];2012年
15 吕涛;姚希贤;;正常与肝纤维化大鼠丹参等活血化瘀药物血清对HSC作用对比研究[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
16 夏红梅;刘黎明;张建军;周莹;戴丹;胡东辉;;抗纤软肝胶囊治疗大鼠肝纤维化的疗效及其对HSC活化及凋亡的影响[A];全国第6届中西医结合传染病学术会议论文汇编[C];2015年
17 王军民;姚希贤;;丹参对Ang-Ⅱ刺激鼠HSC活化Ca~(2+)效应抑制作用的实验研究[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
18 王玉珍;姜慧卿;;法舒地尔通过肌球蛋白轻链磷酸化途经抑制HSC的迁移与黏附[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年
19 姚希贤;蒋树林;吕涛;宋梅;孙泽明;;益肝康对肝纤维化SD大鼠HSCα—SMA和TIMP—1阳性表型的作用[A];中国中西医结合学会第十四次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2002年
20 高月求;吴惠春;孙学华;周振华;张鑫;李曼,;;柔肝方通过抑制FBRS对HSC的活化抑制肝纤维化的机制研究[A];第十一届全国免疫学学术大会分会场交流报告集[C];2016年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 嵇强;基于LSEC对HSC的作用解析扶正化瘀方化学成分F-03抗肝纤维化效应机制[D];上海中医药大学;2019年
2 骆欢欢;苦杏仁苷对HSC活化增殖及其相关细胞因子网络的作用[D];广州中医药大学;2010年
3 韩海啸;酒精性肝硬化中医证候学特点和赤芍对HSC增殖和凋亡的影响[D];北京中医药大学;2007年
4 江远;铁沉积于HSC细胞与肝纤维化相关性研究及复方肝毒清的干预作用[D];广州中医药大学;2009年
5 江育清;舒肝驱毒方对HSC活化增殖及其相关细胞因子作用的研究[D];广州中医药大学;2016年
6 张亚平;从信号转导的不同水平探讨中药复方益肝康抑制HSC增殖及胶原合成的作用机制[D];河北医科大学;2006年
7 张磊;肝纤维化恢复期Kuffer cell对HSC凋亡的调控作用及信号转导机制研究[D];安徽医科大学;2008年
8 康良;“浊毒”立论组方经相关信号通路抑制DMN致肝纤维化及HSC活化的作用研究[D];河北医科大学;2013年
9 顾小红;PARs对大鼠HSC活化、增殖和功能的调控机制及其在肝纤维化中的作用[D];第三军医大学;2007年
10 阳学风;RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响[D];南华大学;2012年
11 黄成;c-FLIP_L在肝纤维化形成与逆转过程中的表达及对TRAIL诱导HSC凋亡的调控作用研究[D];安徽医科大学;2011年
12 侯丽颖;保肝宁对leptin刺激HSC的增殖及其JAK_2-STAT_3信号通路影响的实验研究[D];南方医科大学;2007年
13 卢元媛;基于液相色谱质谱联用技术对复方中药艾可清化学成分及其调节细胞色素P450酶作用的研究[D];广州中医药大学;2018年
14 唐云;土贝母的化学成分及其抗肿瘤活性研究[D];沈阳药科大学;2013年
15 谷荣辉;中国乡土树种元宝枫的化学成分及代谢组学研究[D];中央民族大学;2019年
16 单舒筠;药食两用白果种仁和南非叶的化学成分研究[D];沈阳药科大学;2018年
17 李世哲;中药“复方夏连胶囊”的化学成分分析及体内作用过程研究[D];吉林大学;2018年
18 张广杰;诸葛菜种子化学成分及生物活性研究[D];军事科学院;2018年
19 张永勇;白花蛇舌草化学成分的研究[D];南方医科大学;2008年
20 任强;苦荞麦化学成分及其代谢产物分析和鉴定方法研究[D];北京协和医学院;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 杨妍;澳大利亚新州中文社区学校与私立日校HSC中文课程教学情况调查研究[D];上海交通大学;2018年
2 屈刚;基于质量管理的HSC公司供方评估及监造制度研究[D];电子科技大学;2008年
3 陈英杰;赶黄草对乙肝肝纤维化的疗效及对HSC影响的研究[D];广州中医药大学;2008年
4 吴金成;苦参碱对小鼠急性肝损伤HSC凋亡的影响[D];福建医科大学;2006年
5 曹荣娟;玉屏风多糖对PDGF诱导的大鼠HSC的增殖及ERK1/2传导通路的影响[D];安徽医科大学;2011年
6 黎桂玉;莪术醇干预大鼠血瘀型肝纤维化及LSEC超微结构的实验研究[D];广西中医药大学;2017年
7 赵霞;丹参等活血化瘀中药对IL-1β刺激的HSC的影响[D];河北医科大学;2006年
8 吕涛;丹参等活血化瘀中药药物血清对大鼠肝纤维化HSC作用研究[D];河北医科大学;2003年
9 张露露;无机砷对大鼠HSC纤维化改变及DNMTs表达的实验观察[D];新疆医科大学;2016年
10 王志敏;基于lncRNA-H19探究双氢青蒿素调控肝星状细胞脂滴代谢抗肝纤维化的分子机制[D];南京中医药大学;2020年
11 柳亦松;1.鼻咽癌细胞系HNE1细胞膜蛋白质组分析和膜蛋白数据库的构建 2.肝脏星状细胞(HSC)细胞膜蛋白质组分析[D];湖南师范大学;2004年
12 陈娟;COX-2 shRNA对HSC甘油三酯、胆固醇、维生素A代谢的影响[D];南华大学;2011年
13 许心怡;卵泡抑素样蛋白1在肝星状细胞衰老过程中作用机制的研究[D];江南大学;2020年
14 钟晓琴;HGF对PDGF-BB作用下大鼠原代HSC增殖和凋亡的作用及机制研究[D];重庆医科大学;2007年
15 刘迎春;C/EBPα基因表达对PARs激活HSC促肝纤维化形成的负性调控作用[D];第三军医大学;2012年
16 孙浩平;MAPK反义寡核苷酸对乙醛活化HSC生物特性的影响[D];第三军医大学;2007年
17 欧意桃;黄连素对肝纤维化的防治作用及其机制研究[D];广东药科大学;2017年
18 刘青;SPT抑制剂多球壳菌素对油酸诱导的HSC凋亡及自噬的影响[D];南华大学;2016年
19 游晓莹;多穗柯化学成分研究[D];暨南大学;2019年
20 王洁;东沙海绵的两种共附生真菌Xylaria feejeenisis和Daldinia eschscholtzii的化学成分研究[D];海南大学;2018年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 记者 张梦然;35000粒“灰尘”暴露彗星67P化学成分[N];科技日报;2017年
2 蒋明通讯员 陈丽霞 王怀民;黄连素治疗肝纤维化有效果[N];健康报;2008年
3 吴一福;中药可抑制肝星状细胞“正反馈放大效应”[N];中国医药报;2006年
4 第二军医大学长征医院教授 谢渭芬 整理 王根华;阻断肝纤维化发展的链条[N];健康报;2010年
5 徐琪忠 王根华;长征医院研究揭示肝纤维化发病机制[N];中国医药报;2010年
6 王振坤;肝纤维化是如何发生的[N];家庭医生报;2008年
7 通讯员 陈丽霞王怀民 记者 赵凤华;黄连素可能治肝纤维化[N];科技日报;2008年
8 记者 衣晓峰;肝纤维化形成机制有新发现[N];健康报;2011年
9 记者 张双虎;科学家揭示肝纤维化分子机制[N];中国科学报;2014年
10 木里藏族自治县人民医院 祝玛;肝纤维化的症状及护理方法[N];大众健康报;2020年
11 柯讯;中国科大发现治疗肝纤维化智能疗法[N];中国科学报;2018年
12 孟凡林;中科院:肝纤维化临床智能诊断获新突破[N];健康报;2018年
13 福建莆田 吴志;肝纤维化不可小觑(下)[N];上海中医药报;2018年
14 傅德明;柴胡与丹参配伍抗大鼠肝纤维化作用的实验研究[N];医药经济报;2001年
15 吴杨 杨苏河;减缓肝纤维化进程[N];医药经济报;2001年
16 黄丁毅;福瑞股份:肝纤维化专科面对“做大”命题[N];医药经济报;2010年
17 北京地坛医院传染科主任医师 蔡皓东;肝纤维化是可逆转的[N];保健时报;2010年
18 健康时报记者 刘桥斌;肝纤维化定期做FS检查[N];健康时报;2009年
19 解放军302医院肝纤维化无创诊疗中心 陈国凤 黄显斌 整理;肝纤维化检查进入无创时代[N];健康报;2009年
20 陈汉桥;大连肝纤维化防治有了综合方法[N];中国医药报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978