收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

亚甲蓝光化学法灭活血浆中丙型肝炎病毒的分子生物学机理

倪小菊  
【摘要】: 输血是现代医学不可或缺的重要支撑手段,但输血也存在一定的风险,特别是经输血传播HIV、HBV、HCV等病毒感染的风险。输血相关病毒感染因其涉及面广且预后不良,具有较大的社会负面影响。克服病毒性输血风险,保障输血安全已成为医学界乃至全社会关注的焦点。 由于血液制品病毒标记物检测在方法学上的局限性以及病毒窗口期的存在,目前还不能万无一失地剔除携带病毒的血液或血液成分制品,因此仅依赖血液筛查的手段不能完全杜绝通过输血传播病毒的风险。以阻断病毒通过输血途径传播为目的的血液成分病毒灭活技术被认为是提高输血安全性的一道重要的屏障。对血液成分病毒灭活方法及其机理的研究是输血医学研究的热点之一。 亚甲蓝光化学方法(methylene blue photochemistry,MB-P)目前已成功应用于临床用单袋血浆的病毒灭活,其有效性和安全性已被充分验证,但该方法灭活病毒的分子生物学机理尚不十分明了,与此有关的研究还在继续深入之中。阐明亚甲蓝光化学法病毒灭活的机理将有助方法学的改进,并为其它病原体灭活方法的研究提供理论参照。 本研究选择丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)作为MB-P病毒灭活机理研究的实验对象,主要是因为HCV是我国输血后感染的最主要病原体之一,在影响输血安全的诸因素中占有较大的权重,且该病毒的感染活性目前尚无法用体外细胞培养的方法或除黑猩猩之外的动物模型感染方法予以验证,证实MB-P方法对HCV的灭活的效果,具有十分重要现实意义。同时HCV作为脂质包膜RNA病毒,可较贴切地阐明MB-P对此类病毒的灭活的机理,有助于体现相应的理论参考价值。 本研究运用PCR和荧光定量PCR技术对MB-P处理后HCV RNA的降解情况进行了研究,并对HCV RNA的降解与HCV RNA结构变化之间的关系进行了初步的探讨。 本实验室的前期研究表明MB-P处理能引起HCV NS_5基因区段的降解。在此基础上,针对全长HCV基因组序列,本题选择了一段相对保守的长度为844bp的5’-NCR(5'-non-coding region)及相邻的核心区(core region,C区)基因片断,以及一段长度为973bp的NS_2基因片断作为研究对象。通过MB-P处理前后不同时间点留样,对这两个区段RNA进行RT-PCR检测及荧光定量PCR检测。结果表明:在MB-P处理早期,血浆中的HCVRNA迅速降解,在处理20分钟内从5.5×10~5copies/ml降低到8.2×10~3copies/ml,而在处理后期降解趋势逐渐缓慢,在处理60分钟后可检测到的核酸量降低到2.8×10~3copies/ml。整个过程中HCV RNA以对数模式降解。实验结果验证了病毒核酸是MB-P灭活的靶目标之一。 为了揭示除核酸以外的病毒构件及病毒蛋白成分在MB-P灭活过程中的作用,本研究设计了体外转录HCV RNA的灭活实验。构建了分别插入HCV 5’-NCR和C区基因、NS_2基因片断的2个重组质粒,鉴定后进行体外转录试验。将体外转录的HCV RNA分别用代血浆(羟乙基淀粉20—氯化钠注射液,HES20)和PBS缓冲液稀释至与血浆所含病毒相近的浓度(≥10~5copies),在无除核酸以外的病毒构件及病毒蛋白成分的条件下进行与前述实验条件相同的MB-P处理。结果发现,体外转录HCV RNA在MB-P处理下依然能发生降解,在处理20分钟内可检测到的核酸量从3.2×10~5copies/ml降低到6.2×10~4copies/ml,处理60分钟后降低至2.0×10~4copies/ml,表明MB-P方法能直接作用于核酸,使核酸发生降解从而达到病毒灭活的目的。同时,血浆中病毒的核酸降解速率明显快于HES20和PBS中的体外转录HCV RNA,提示除核酸以外的某些病毒构件或蛋白可能会影响MB-P对HCV RNA的作用效率,相关的研究尚有待进一步展开。 实验研究首次证实MB-P能有效降解HCV-RNA 5’-NCR+C区及NS_2区基因片断,表明:1)亚甲蓝能直接作用于病毒核酸,在光照条件下降解病毒核酸使病毒灭活;2)MB-P处理下,HCV RNA的浓度呈对数形式下降;3)该方法对体外转录HCV-RNA的降解效率相对低于对血浆中HCV-RNA的降解效率。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙锦光 ,刘典聪,赵德英,马山,仲立军;病毒灭活人凝血酶原复合物的研究[J];山东医药工业;2001年01期
2 赵宜为,常娅莉,王巍,尚立群;病毒灭活和SD血浆的制备[J];微生物学杂志;2003年02期
3 王慧茹;沈莉;李建民;张义兵;赵晓霞;;灭菌方式不同对病毒灭活血浆制品质量的潜在影响[J];河北医药;2008年11期
4 王德升;进一步重视血液制品的安全性[J];中国输血杂志;2001年06期
5 张西春;张雅莉;赵敏;;输注血浆成分传播病毒的因素及病毒灭活的重要性[J];山西医药杂志;2009年10期
6 周海云;血液制品病毒灭活方法研究进展[J];微生物学免疫学进展;1994年03期
7 陈春田;刘希真;李东力;;血液制品中病毒的灭活方法与应用[J];沈阳部队医药;2001年02期
8 刘兰军,葛永红,唐安芬,陈学奎,谢觉林,沈富兵,邓杰,吴永林,钱汶光;验证低pH法灭活人白细胞干扰素α病毒的效果[J];中国生物制品学杂志;2003年05期
9 王雄;血液制剂的病毒灭活方法[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1994年04期
10 丁艳,马山;微波加热法对低pH静注丙球病毒灭活探讨[J];泰山医学院学报;2001年04期
11 赵宜为,常娅莉,王巍,刘燕,尚立群,梁艳,丁宜清;S/D灭活血浆内脂包膜病毒及病毒灭活血浆的研究[J];微生物学免疫学进展;2004年01期
12 肖云贵,许金波;血液病毒灭活机理及其效果评价[J];中国输血杂志;2005年05期
13 李雪英;韩惠云;邱玉霞;李运琴;冯云;;亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响[J];临床输血与检验;2009年02期
14 赵淑红;徐爱华;;亚甲蓝光化学法用于血浆病毒灭活[J];中国煤炭工业医学杂志;2009年03期
15 常娅莉,刘燕,赵宜为,袁发文,梁艳,丁宜清;S/D处理血浆过程中的脂包膜病毒灭活试验观察[J];微生物学杂志;2003年06期
16 曹锁春;张力超;刘息平;邱玉华;;病毒灭活冷沉淀的制备及初步评价[J];临床输血与检验;2006年03期
17 程玉根;柏则蓉;贾红志;;亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响[J];临床血液学杂志;2007年04期
18 宋玉和;辛永红;;血液成分病毒灭活与安全输血[J];临床血液学杂志(输血与检验版);2007年01期
19 程玉根;柏则蓉;贾红志;;亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆成分的影响[J];临床血液学杂志(输血与检验版);2007年04期
20 刘鹏翰;潘越飞;李清棠;;血液制品的病毒灭活[J];中国输血杂志;1992年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐玉莲;朱小晨;王小杰;王迪;郭志伟;;血浆经亚甲蓝光化学法病毒灭活前后质量分析[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
2 尹惠琼;马玉媛;刘明;王蕊;章金刚;;血液制品病毒灭活/清除技术平台的建立与应用[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
3 邱颖婕;章舜玮;黄晨佳;金魏名;;病毒灭活新鲜冰冻血浆制备方法的探讨[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
4 张博;郑岚;王迅;钱开诚;;核酸扩增技术对亚甲蓝光化学病毒灭活效果的评价[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
5 王敏;侯继锋;;血液制品中人细小病毒污染及其灭活进展[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
6 郑炎;贾玉华;杨晓敏;张伟青;刁武平;何毅明;朱威;;二次病毒灭活冻干人凝血因子Ⅷ的研制[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
7 尹惠琼;王蕊;杨姝;马玉媛;杜杰;靖培培;刘明;赵雄;章金刚;;生物活性物质病毒安全检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 黄文杰;范恩勇;;MB法病毒灭活对凝血因子影响实验研究[A];中国输血协会第四届输血大会论文集[C];2006年
9 钱开诚;;血液成分病毒灭活研究的进展[A];中国输血协会第三届输血大会论文专辑[C];2004年
10 黄毅;王憬惺;;红细胞保存液对光化学病毒灭活处理后红细胞生物学特性的影响[A];中国输血协会第三届输血大会论文专辑[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 王飞;光化学法灭活红细胞制品中的病毒及相关机理的研究[D];中国协和医科大学;2002年
2 郑耀通;闽江流域福州区段水体环境病毒污染、存活规律与灭活处理[D];福建农林大学;2002年
3 张博;亚甲蓝光化学法对血液及血制品中淋巴细胞及病毒的灭活效果及其机理[D];华东师范大学;2011年
4 王小芳;一、选择性5-HT再摄取抑制剂的设计与合成 二、血液制品的病毒灭活剂研究[D];中国协和医科大学;2000年
5 陈昭斌;噬菌体作用指示病毒用于消毒效果评价的研究[D];四川大学;2006年
6 赵祖国;污水中病毒浓集、消毒规律及灭活机理研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王淑英;通用型病毒灭活血浆制备方法研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
2 张敬敬;输血相关病原体灭活及检测技术的研究[D];华东师范大学;2011年
3 李斌;人纤维蛋白原分离纯化工艺研究[D];山东大学;2013年
4 王敏;血液制品人细小病毒B19污染情况调查及新型病毒灭活方法研究[D];中国药品生物制品检定所;2011年
5 李炜;人血浆α1-抗胰蛋白酶的纯化与鉴定[D];北京生物制品研究所;2005年
6 蒋仁举;血浆中病毒灭活的研究[D];四川大学;2004年
7 李秀娟;亚甲兰光化学法灭活血浆乙肝病毒及对红细胞膜的损伤研究[D];福建医科大学;2008年
8 刘欣晏;人血白蛋白连续流压滤工艺研究[D];山东大学;2008年
9 马永达;病毒灭活人血浆对人体凝血功能及血液流变学的影响[D];第三军医大学;2005年
10 倪小菊;亚甲蓝光化学法灭活血浆中丙型肝炎病毒的分子生物学机理[D];华东师范大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;创新基金支持 二次病毒灭活工艺生产pH4项目[N];中国高新技术产业导报;2002年
2 本报记者  龙丽;山东米歇尔股权纠纷真相[N];21世纪经济报道;2006年
3 江南雪舞;“杀灭”病毒的理化因素[N];大众卫生报;2005年
4 新华社记者 张景勇;这么快就出成果,SARS疫苗可靠吗?[N];新华每日电讯;2004年
5 周冰;专家为血液制品安全“支招”[N];健康报;2002年
6 本报记者 陈虎;山东米歇尔生物大小股东对峙调查[N];21世纪经济报道;2004年
7 记者 石圭平;8种人不适宜接种流感疫苗[N];新华每日电讯;2003年
8 张东风;“佰易事件”再次敲响警钟[N];中国中医药报;2007年
9 德州市中心血站 邹德晓;现代输血新观念[N];德州日报;2010年
10 记者 杨丽加;输血将变得安全[N];健康报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978