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苦荞蛋白酶解物的制备及抗菌活性的研究

陈英娇  
【摘要】:荞麦是一种药食两用的植物,具有较高的营养价值和保健功能(具有防癌、降血糖、降血脂、抗衰老等多种生理功能)。其中,荞麦蛋白作为荞麦中重要的生物活性物质,具有天然的抗菌活性和一定的抗氧化能力,因此具有重要的研究、开发价值和广阔的市场前景。本文以山西苦荞为原料,在苦荞籽粒去壳、过筛、脱脂等预处理的基础上,建立了一套荞麦蛋白的提取、分离、酶解的工艺方案,并对所制备得到的苦荞蛋白粗提物和苦荞蛋白酶解产物进行了体外抑菌活性和抗氧化能力的研究。研究内容主要包括以下几个方面:(1)采用硫酸铵盐析法提取苦荞水溶性蛋白,采用DEAE-Fast-Flow离子换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析法初步分离得到苦荞蛋白粗提物,再将粗提物分别经1h胃蛋白酶、2h胰蛋白酶酶解和Sephadex G-25凝胶纯化,得到了4个主要的苦荞蛋白酶解产物,依次命名为Pep1、Pep2、Pep3、Pep 4。(2)选取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌为指示菌,并采用滤纸片扩散法检测苦荞蛋白粗提物对以上菌株的抗菌活性。实验结论得出:除大肠杆菌外,苦荞蛋白粗提物对上述几种菌都具有抑制作用,抑菌活性也随浓度的增大而增强,其中对革兰氏阳性菌(G+)的抑菌效果优于革兰氏阴性菌(G-)。(3)选取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌为指示菌,采用二倍稀释法分别测定了苦荞蛋白酶解产物(Pep1-Pep 4)的最小抑制浓度(MIC)。实验结果表明:苦荞蛋白酶解产物对上述4种指示菌均具有抑菌作用,抑菌能力依次为:金黄色葡萄球菌﹥鼠伤寒沙门氏菌﹥阪崎肠杆菌﹥大肠杆菌,其中Pep3和Pep4对金黄色葡萄球菌抑制效果最显著,MIC分别为:0.375mg/ml和0.093 mg/ml。(4)选择三种常用的体外抗氧化模型(DPPH、ABTS、FRAP),研究了不同浓度下苦荞蛋白粗提取物的抗氧化效果。结果显示:在一定浓度范围内,随着苦荞蛋白粗提物浓度的增强,抗氧化能力也不断提高,略低于对照VC和BHT;以苦荞蛋白酶解产物的DPPH抗氧化活性实验为例,实验结果发现:在相同浓度条件下,苦荞蛋白酶解产物的自由基清除率与苦荞蛋白粗提物相比有明显的提高,其中苦荞蛋白酶解产物Pep4的清除率接近80%(与同浓度下的VC相当),说明酶解后的苦荞蛋白产物具有更强的抗氧化活性。


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