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gna基因在大豆上的转化及转化体系的优化

马晓红  
【摘要】: 本研究通过对大豆组织培养消毒处理方法对种子萌发的影响,来研究不同消毒剂及不同处理方法对大豆种子消毒效果的影响,从而减少由于种子消毒不彻底造成实验材料的浪费并影响后期的研究工作。利用大豆不同品种的下胚轴、顶芽、子叶节、原位再生等几种外植体进行诱导植株再生的实验,并通过添加不同浓度的6-BA来观察诱导愈伤组织和出芽的情况,为下一步的转化实验建立一个良好的组培平台。最后对大豆转化体系的几个因素进行优化实验,并以原位再生体系为平台进行gna基因的转化。实验主要结果如下: 1.大豆组织培养最佳消毒处理方法为70%酒精预处理后饱和漂白粉溶液4℃处理1~2h;或用0.1%HgCl2溶液作消毒剂4℃条件下处理2h,能取得较好的消毒效果。 2.各种外植体诱导愈伤组织和出芽最适6-BA浓度不同,其中子叶节为1.0mg/L,顶芽为2.0mg/L,原位为1.0mg/L至2.0mg/L;下胚轴为2.0mg/L。原位在1.0mg/L 6-BA的基础上添加0.1mg/L IBA时出芽率比单独加6-BA要高。 3.大豆下胚轴、子叶、顶芽均较易诱导出愈伤组织,但这三种外植体出芽率较低,子叶节和原位再生出芽率较高,五种外植体出芽率依次为原位>子叶节>顶芽>下胚轴>子叶。 WP=3 4.不同基因型的外植体在诱导愈伤组织和出芽上存在着显著差异,分析品种间差异表现发现,基因型稳定性在不同外植体诱导愈伤组织和出芽上较一致,稳定性影响诱导愈伤组织和出芽,其中品种东农42号表现好。表明应该注重不同基因型稳定性上的差异。 5.大豆品种对农杆菌的敏感性普遍较低,并且存在着较强的基因型依赖性。 6.外植体不同的预培养时间、感染时间和共培养时间对大豆的转化有 明显的影响,以预培养1d,感染10min后共培养3d为宜。 7.以再生频率较高的原位再生体系为平台进行gna基因的转化,通过卡那霉素进行抗性筛选后得到再生植株,随机选取15株进行PCR检测,9株呈现阳性反应。


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