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纳米金免疫层析法定量检测肿瘤标志物的研究

方菲  
【摘要】: 20世纪80年代,纳米科技在多学科交叉的基础上发展成为一门新兴学科,其中纳米免疫层析检测技术是20世纪90年代出现的新兴免疫检测技术,它以快速、简便、直观、经济等优势备受人们的青睐。纳米金免疫层析方法(Gold immunochromatography assay,GICA)是将纳米金免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法。但现有的纳米金免疫层析技术只能用于定性和半定量的检测,难以满足临床检测指标定量化的要求。因此,免疫层析技术正朝着定量、提高灵敏度、多元检测等方向发展。本文主要研究了纳米金免疫层析技术用于定量检测纤维连接蛋白、癌胚抗原等肿瘤标志物方面的研究。 (1)纳米金标记技术是以纳米金作为示踪标记物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。利用纳米金在碱性环境中带负电荷的性质,在适当的条件下可以与蛋白分子通过物理吸附作用发生牢固结合。本研究采用目测法,研究了纳米金标记纤维连接蛋白和癌胚抗原的最佳pH和最佳标记蛋白量,实验结果表明他们的最佳标记pH均为9,最佳标记蛋白量分别为6ug·ml-1,18ug·ml-1 (2)本文采用双抗体夹心法,将特异性的抗体先喷覆于硝酸纤维素膜上,制成免疫层析检测试纸条,装入检测卡中备用。点样后将检测卡插入金标定量检测仪中,检测结果表明,所制备的试纸检测卡简便快速,检测灵敏度分别达50ng·ml-1、3 ng·ml-1,均达到临床检测要求,并且定量曲线均呈现出较好的线性。没有交叉反应,稳定性良好。


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