B细胞淋巴瘤内miR-17-92基因转录调控机制研究

【摘要】：MicroRNA (miRNAs)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,其在动植物体内对调控某些基因的表达具有重要作用。近期,miRNAs被发现存在于细菌,绿藻类,病毒及广泛的动物体中。其通过对信使RNA的调控使其降解或者抑制其转录使得miRNAs在真核生物基因转录调节中具有重要作用。miRNAs的重要功能还包括调控细胞增值,细胞凋亡,调控发育时间,分化及胚胎发生。 越来越多证据表明,miRNAs与癌症中有着重要的关系,它既可以是癌基因又可以是抑癌基因,并且在特定的情况下具有双重的角色。目前,在HomoSapiens中已有677个miRNAs被发现,并且越来越多的科学研究关注于miRNAs的基因调控功能。 miR—17-92基因簇位于C13orf25基因的第一个内含子中,因含此基因的染色体在恶性淋巴瘤中扩增而被首次描述。miR—17-92基因簇可产生有六个不同的成熟miRNA:miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-19b, miR-20a and miR-92a。miR—17～92基因簇具有癌基因的功能。具体表现在,抑制癌细胞的细胞凋亡,促进细胞增殖,促使肿瘤血管生成。人类miR—17-92基因簇位于C13orf25基因的第三个内含子的中,它通常过表达于不同类型的B细胞淋巴瘤中,包括Burkitt淋巴瘤,弥漫性大壁淋巴瘤,滤泡性淋巴瘤,套细胞淋巴瘤,也过表达于其它实体肿瘤中,例如肺癌,胰腺癌,前列腺癌,乳房癌,胃癌,结肠癌。 虽然对miR—17Y92基因簇的基因调控功能了解到越来越多,但是对于miR-17～92簇基因本身的转录调控机制知之甚少。近期研究仅仅发现其可被转录因子c-Myc和E2F激活。因此,本论文对miR—17～92基因簇的转录调控机制进行了研究。 通过荧光素酶检测试验,本研究鉴定了此基因的核心启动子区域。通过对基因启动子的删除和突变研究发现,此启动子被多个转录因子所共同调控,每个单独的转录因子对启动子有适度的调控作用。本研究发现,对转录因子SP1的假定结合点进行突变后,减少了70%的启动子活性。已知c-Myc可以诱导此基因的的转录,我们发现在启动子区将c-Myc的结合位点突变后,启动子的活性非但没有减弱,反而被增强。通过进一步研究证实发现,具有转录抑制活性的MYC家族转录因子Mxi1直接结合在启动子区域。为了进一步了解启动子附近区域对基因转录调节的影响,本文对包含此基因22.5kb的区域进行了研究。试验证明,此基因具有DNaseⅠ超敏感区域和组蛋白修饰活跃区,预示了其具有增强子元件。通过研究,本文证实了在启动子附近至少两个区域具有增强子活性。 在一些肿瘤中C13orf25基因是一个重要的癌基因,其转录产物microRNA所调控的基因对细胞增殖以及存活有重要的调控作用,因此,需要对miR-17Y92的转录水平调控进行进一步的研究。