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南京地区五岁以下儿童病毒性腹泻的分子流行病学研究

李晓乐  
【摘要】:第一部分:南京地区五岁以下儿童常见腹泻病毒的分子流行病学研究 目的:通过病例对照研究以了解2010-2011年度南京地区四种常见腹泻病毒在五岁以下儿童中的分子流行病学特征,为小儿病毒性腹泻的防治提供依据。 方法:采集2010年7月至2011年6月南京医科大学附属南京儿童医院5岁以下腹泻患儿和健康儿童的粪便标本各428份。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测轮状病毒,采用巢式反转录-聚合酶链反应(Nest RT-PCR)对轮状病毒阳性标本进行分型;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测杯状病毒和星状病毒,聚合酶链反应(PCR)检测腺病毒。 结果1.病例组428份标本中244份(57.0%)至少检出四种病毒中的一种。常见腹泻病毒中,HRV阳性率最高,检出率为43.9%,其次为HuCV(14.7%), HAstV(3.97%),HAdV(3.03%)。轮状病毒G血清型中以G1型(39.9%),其次是G3型(22.3%),P基因型中以P[8]型(68.1%)为主,其次是P[4](5.4%),G血清型与P基因型组合中最常见的为G1P[8](31.4%),其次是G3P[8](15.4%)。杯状病毒中92.1%属于诺如病毒GII型,未检出诺如病毒GI型,札如病毒5例,以诺如病毒GⅡ-42006b型为主要流行株。15例星状病毒感染中14例HAstV1型,1例HAstV5型,均为genogroup A。人腺病毒以F组的AdV41型(8/13)为主,同时还发现A组AdV31型1例,C组AdVl型3例。 2.对照组428份标本中仅有39份(9.11%)至少检出四种病毒中的一种。其中轮状病毒检出3例,分别为G1P[8]、G3P[8]、G2P[4]。对照组标本杯状病毒检出19例,诺如病6例,札如病毒11例,2例为诺如病GⅡ型和札如病毒混合感染。HAstV阳性率为3.03%(13/428),2例HAstV1型,1例HAstV6型,10例HAstV5型。HAdV阳性率为0.07%(3/428),AdV1型、AdV3型和AdV12型各1例。 3.病例组428份标本中混合感染共35份(8.18%),均为2种病毒混合感染,HRV和HuCV混合感染最多占75%(21/35)、其次是HRV和HAstV为22.9%(8/35),发病高峰在10-12月份(20/35)。对照组不存在混合感染。 结论:病毒是本地婴幼儿急性腹泻的常见病原体。轮状病毒为最主要的病毒病原,主要流行株为G1P[8]。札如病毒和星状病毒的无症状感染值得关注,长期的系统监测具有重要意义。 第二部分:人博卡病毒感染与婴幼儿急性胃肠道炎的相关性研究 目的:通过临床病例对照研究了解不同基因型人博卡病毒(Human Bocavirus,HBoV)在南京地区婴幼儿中的流行情况,探讨可能的危险因素及临床特征,以及不同基因型之间的差异,评价HBoV感染与婴幼儿腹泻之间的相关性。 方法:采集2010年7月至2011年6月南京医科大学附属南京儿童医院5岁以下急性胃肠炎患儿粪便标本及儿童保健中心健康婴幼儿正常粪便标本各428份。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检钡HBoV并确定其病毒载量,同时通过巢式PCR(NestPCR)对博卡病毒阳性标本进行检测并测序确定其基因型别。使用MEGA5.0软件进行基因序列分析,SPSS17.0进行统计学分析,探讨其疾病相关性。 结果:1、HBoV在428份急性胃肠炎患儿粪便标本中阳性检出率22.9%(98/428),平均病毒载为4.11×104copies/ml,而对照组HBoV阳性率仅8.88%(38/428),平均病毒载量为4.04×105copies/ml,2组HBoV检出率差异有统计学意义(χ2=29.12,P=0.000),病例组HBoV混合感染较对照组多见(χ2=31.47,P=0.000)。 2、病例组HBoV2检出率为15.65%(66/428),被检出的五种病毒中位居第二;HBoV1检出36(8.41%)例,HBoV3检出3(0.7%)例,HBoV4没有检出,HBoV2检出率及病毒载量高于HBoV1(P0.02)。对照组HBoV2检出率6.07%(26/428),检出率最高;HBoV1检出24(5.61%)例,HBoV3和HBoV4没有检出。病例组HBoV2检出率及病毒载量高于对照组(P0.05),HBoV1和HBoV2混合感染分布较多。 3、病例组HBoV病毒阳性患儿中与常见腹泻病毒混合感染率高达59.2%,其中与HRV混合感染有41例,HBoV2与HRV混合感染后更易出现发热、呕吐(P0.02)症状。对照组75份(17.52%)标本至少检出1种病毒,仅有3例是HBoV与HuCV的混合感染。 4、多因素条件Logistic回归分析结果显示HBoVl与婴幼儿腹泻没有疾相关性,HBoV2与婴幼儿急性胃肠炎有疾病相关性(OR=1.984,CI=1.052-3.742)但弱于HRV、HuCV和HAdV。HBoV2感染在RV组和非RV组的检出率有统计学意义(χ2=13.92,P<0.05),单因素条件Logistic回归分析发现HBoV2和HRV感染具有相关性(OR=2.263,CI=I.446-3.541,P=0.000)。 结论:1、博卡病毒感染在南京地区婴幼儿中普遍存在,检出率仅次于轮状病毒,通过Logistic回归分析表明HBoV2是婴幼儿急性胃肠炎的病原,但其病原学作用弱于HRV、HuCV和HAdV。博卡病毒感染并不影响疾病的严重程度。 2.人博卡病毒与其它病毒混合感染率较高,尤其是和轮状病毒混合感染;与HRV混合感染后较易出现发热、呕吐症状,可能是HRV的协同作用;HRV感染可能是HBoV2感染的易感因素。


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