收藏本站
收藏 | 论文排版

晚期糖基化终产物诱导内皮细胞中的自噬

谢莹  
【摘要】:目的: 观察晚期糖基化终产物(advanced glycation endproducts AGEs)对人内皮细胞中自噬的诱导,并探讨自噬在动脉硬化内皮细胞损伤中的作用。 方法: 1.收集糖尿病合并动脉粥样硬化(Atherosclerosis AS)患者手术切除的颈动脉动脉粥样硬化斑块,通过HE染色、荧光免疫染色并利用内皮细胞特异性标记物vWF,标记血管内皮细胞;通过透射电镜观察细胞超微结构及自噬的发生;荧光免疫染色观察自噬特异标记物MAP1-LC3(microtubule-associated protein light chain 3)的表达;观察人颈动脉粥样硬化斑块中内皮细胞的分布及自噬泡的形成。 2.运用不同浓度的糖基化-牛血清白蛋白(advanced glycation endproduct-bovine serum albumin AGE-BSA)作用不同时间来处理人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells HUVECs),透射电镜观察细胞超微结构;MDC自噬囊泡染色;应用免疫印迹技术检测自噬特异性标识蛋白LC3-II/β-actin及溶酶体相关膜蛋白Lamp1的表达,并用荧光免疫标记MAP1-LC3,以此评价AGE-BSA对HUVECs自噬水平的影响。 3.自噬诱导剂雷帕霉素和抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine 3-MA)干预后,应用MTT法检测细胞生存率;酶联免疫技术检测培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase LDH)含量,了解自噬对AGE-BSA造成的HUVECs损伤的影响。 4.通过流式细胞技术检测培养基上清中活性氧物质(reactive oxygenspecies ROS)含量;并用抗氧化剂维生素E(α-tocopherol)干预,以探讨氧化应激在AGE-BSA诱导自噬中的作用,进一步探讨自噬在AGE-BSA诱导的内皮细胞损伤中的作用。 结果: 1.通过HE染色及荧光免疫染色,我们发现,在糖尿病患者颈动脉粥样硬化斑块纤维帽、内膜结合区(即动脉粥样硬化肩部)以及脂质坏死区边缘有较多的新生血管内皮细胞,新生血管内皮细胞中MAP1-LC3表达较正常血管内皮细胞增加。透射电镜可观察到新生血管内皮细胞中的大量自噬产生。 2. MDC染色、荧光免疫细胞染色和透射电镜结果均显示AGE-BSA处理后可诱导HUVECs发生自噬;免疫印迹技术结果显示AGE-BSA可上调HUVECs LC3-II/β-actin、Lamp1蛋白表达,且此作用在6 h达到高峰。同时自噬抑制剂3-MA能够抑制AGE-BSA诱导的HUVECs自噬,而自噬诱导剂雷帕霉素能够促进HUVECs自噬的发生。 3. AGE-BSA处理HUVECs 6 h,抑制了细胞增殖,自噬抑制剂3-MA能够明显促进AGE-BSA对细胞增殖的抑制,而自噬诱导剂雷帕霉素能够缓解AGE-BSA对细胞增殖的抑制。AGE-BSA处理HUVECs后,造成LDH漏出率明显增加,而自噬抑制剂3-MA能进一步增加AGE-BSA诱导的细胞上清LDH的漏出,自噬诱导剂雷帕霉素对AGE-BSA诱导的细胞上清LDH的漏出无影响。 4. AGE-BSA处理能够增加HUVECs胞内活性氧(ROS)水平增加。抗氧化剂α-tocopherol不仅能够降低AGE-BSA诱导的胞内ROS水平,同时能抑制AGE-BSA诱导的LC3-II/β-actin表达上调。 结论: 糖尿病病人颈动脉粥样硬化不稳定斑块的内皮细胞中存在自噬现象;AGE-BSA(100μg/ml)能在一定时间增加体外培养的HUVECs细胞株的自噬水平,在6 h达到高峰。而自噬增加能减少AGE-BSA诱导的细胞损伤及LDH漏出率,在AGE-BSA诱导的内皮细胞损伤中发挥保护作用;ROS参与了AGE-BSA诱导的内皮细胞自噬水平上调。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 强强;马建芳;王晓强;潘静;赵开军;孙青芳;卞留贯;;大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclin 1的表达变化[J];中国微侵袭神经外科杂志;2009年04期
2 孔晓霞;张宏宇;康劲松;;Bcl-2在H_2O_2诱导神经胶质瘤自噬中的作用[J];中国病理生理杂志;2010年10期
3 崔侨;田代真一;小野寺敏;池岛乔;;冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制[J];药学学报;2007年01期
4 陈亮;辛钟成;郭应禄;;Leydig细胞睾酮合成功能和自噬调控[J];中国男科学杂志;2007年11期
5 刘全;王建军;潘永成;孟利峰;詹曦;郑庆丰;;Beclin1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J];肿瘤防治研究;2008年03期
6 贾勇圣;刘彦明;王会珍;张丹参;;程序性细胞死亡与循环经济[J];河北北方学院学报(医学版);2008年06期
7 杨光;祝元刚;杨慧;;雷帕霉素抗神经退行性病研究进展[J];基础医学与临床;2008年12期
8 钟春林;陈丽;;自噬在心脏疾病中的研究[J];国际心血管病杂志;2009年05期
9 杨光明;高鹏;郑杰;;自噬——程序性细胞死亡的执行者与管理者[J];医学综述;2010年14期
10 李冬娜;梁幼生;周永华;张焕相;沈海英;骆伟;龚唯;诸葛洪祥;;刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年04期
11 陆立鹤;颜建云;于汇民;刘筱霭;;自噬参与氧化性低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞钙化[J];中山大学学报(医学科学版);2010年06期
12 刘慧慧;曹勇军;张艳林;杨亚萍;刘春风;;纤维蛋白诱导的自噬促进人脐静脉内皮细胞增殖与血管腔样结构形成[J];江苏医药;2011年16期
13 胡雯,朴英杰;秋水仙素对大鼠肝细胞溶酶体自噬作用的超微结构及细胞化学观察[J];第一军医大学学报;1989年04期
14 齐丽莎;孙保存;;细胞自噬及其在肿瘤发生过程中的作用[J];国际肿瘤学杂志;2006年12期
15 梁德森;田茂霖;吕海涛;汪大伟;李正天;;三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究(英文)[J];哈尔滨医科大学学报;2007年05期
16 付校;潘永成;王建军;刘全;杨光海;李劲松;;自噬在长春瑞滨诱导的肺癌细胞A549死亡中的作用[J];中国肺癌杂志;2008年03期
17 何才姑;钱长晖;黄玉梅;江澍;;自噬在大鼠坐骨神经横切后施万细胞去分化中的作用[J];福建中医学院学报;2009年05期
18 黄新;白红民;陈亮;李宾;卢亦成;;自噬相关基因Beclin1在星形细胞瘤中的表达及意义[J];中国微侵袭神经外科杂志;2009年12期
19 单国用;刘兴安;张松;侯继院;;食管鳞状细胞癌组织中自噬基因Beclin 1蛋白的表达[J];郑州大学学报(医学版);2010年03期
20 张志才;邵增务;熊蠡茗;杨述华;车彪;邓超;;自噬在骨肉瘤化疗中作用的体内研究[J];中国中医骨伤科杂志;2010年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韦雪;漆永梅;张迎梅;;镉、活性氧自由基与自噬发生的分子机制[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)[C];2011年
2 李康生;代剑平;;病毒感染与细胞自噬[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2011年
3 王平;;骨骼肌自噬及运动对其影响机制研究进展[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
4 胡占英;张靖溥;孟杰;佟军威;秦伟;;斑马鱼自噬途径与帕金森病的相关性[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
5 陈永;邹珅珅;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的小G蛋白Ypt51对细胞自噬的影响[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
6 ;自噬改变在锰诱导的PC12细胞毒性中的作用[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
7 高俊玲;洪铭岩;王焕;李冉;田艳霞;都灵杰;崔建忠;;大鼠弥漫性脑创伤后脑皮质神经元自噬的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
8 邹珅珅;陈永;刘玉涛;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的Trs130参与细胞自噬的研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
9 陈加祥;伍一军;;溶血磷脂酰胆碱促进人成神经瘤SH-SY5Y细胞自噬[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
10 胡帅尔;杨杏芬;黄俊明;周静;沈汉明;;穿心莲内酯对自噬及顺铂诱导细胞凋亡的影响[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谢莹;晚期糖基化终产物诱导内皮细胞中的自噬[D];苏州大学;2011年
2 易聪;乙酰化在自噬过程中的功能和分子机制的研究[D];清华大学;2012年
3 曾蓉;饥饿诱导的自噬在多发性骨髓瘤细胞中的特点及冬凌草甲素作用的机制研究[D];华中科技大学;2011年
4 张俊;自噬在肺缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2013年
5 郑芳;两种小分子化合物调节自噬及其相关生物学功能的研究[D];中国科学技术大学;2012年
6 张艳林;自噬在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤中的作用及其机制探讨[D];苏州大学;2010年
7 吴雅春;自噬在结肠癌及胃癌细胞体外药物干预过程中的作用研究[D];浙江大学;2010年
8 蔡增林;Dynein在α-synuclein自噬性清除中的作用[D];苏州大学;2010年
9 肖荣;自噬在严重烧伤早期心肌损害中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2012年
10 刘波;乙型肝炎病毒通过干扰溶酶体成熟抑制细胞自噬性降解途径[D];浙江大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 涂芊茜;自噬在脂肪酸诱导肝损伤中的作用及机制的初步研究[D];第二军医大学;2011年
2 陈哲;自噬在人骨髓间充质干细胞放射损伤过程中的作用研究[D];兰州大学;2011年
3 张晓延;肠道病毒71型诱导细胞自噬、凋亡及相互调控关系的研究[D];北京协和医学院;2011年
4 冯文峰;血小板中自噬发生及功能研究[D];浙江大学;2012年
5 高灵素;自噬对多发性骨髓瘤细胞生存及增殖的影响及其可能机制[D];苏州大学;2012年
6 周蜜;自噬与慢性阻塞性肺疾病[D];重庆医科大学;2013年
7 李媛媛;奥沙利铂诱导人肝癌细胞株自噬潮的增加及其对细胞活力的影响[D];安徽医科大学;2013年
8 刘宣宣;镉诱导人肝肾细胞自噬及相关蛋白作用初步研究[D];南京师范大学;2013年
9 陈清凤;工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞自噬的诱导作用[D];浙江大学;2011年
10 解艳艳;肿瘤细胞自噬与肿瘤细胞抗药性机理的初步研究[D];山东大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张明永;水稻自噬基因研究取得新进展[N];广东科技报;2011年
2 记者白毅;介入细胞自噬过程可减轻缺血性脑损伤[N];中国医药报;2009年
3 记者 胡德荣;肝癌患者自噬性缺陷表型与预后不良紧密相关[N];健康报;2008年
4 记者 白毅;北大揭示抑癌因子抗肿瘤新机制[N];中国医药报;2010年
5 吴一福;西京医院振荡法支架种植内皮细胞获成功[N];中国医药报;2008年
6 衣晓峰 李媛媛;化疗可以有另一种方式[N];健康报;2006年
7 赵军;耳毒性药物对耳蜗螺旋动脉平滑肌和内皮细胞电生理特性的影响项目[N];科技日报;2007年
8 吴一福;PTFE血管材料可携载VEGF基因转染[N];中国医药报;2006年
9 杨茜;美学者发现抗癌药新生物指标[N];中国医药报;2006年
10 ;中药抗血栓机理及对内皮细胞的生物医学研究取得佳绩[N];科技日报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978