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血管性血友病因子裂解酶在肾病综合征患者血浆中的变化和人肾小管上皮细胞上的表达及其影响因素

蒋丽琼  
【摘要】:目的: 检测肾病综合征(NS)患者血浆中血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)的抗原和活性水平,分析并探讨ADAMTS13在NS患者血浆中的变化及其临床意义;观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞(human kidney-2,简称HK2)上ADAMTS13表达的影响,初步分析其意义。 方法: 1.收集苏大附一院肾内科2009年6月至2010年5月住院治疗的70例NS患者和48例正常体检者的空腹静脉血血浆,测定血浆中ADAMTS13的抗原及VWF的抗原水平,并测定部分患者及正常者血浆中ADAMTS13的活性水平。 2.所有患者均行经皮肾活检术,根据病理结果分为膜性肾病组(membranous nephropathy group,简称MN组,n=30)和非膜性肾病组(non-membranous nephropathy group,简称non-MN组,n=40),比较两组患者及正常者血浆ADAMTS13抗原、ADAMTS13活性、VWF抗原、VWF/ADAMTS13抗原比值、VWF/ADAMTS13活性比值的差别,并分析ADAMTS13抗原、活性与有关临床指标之间的相关性。 3.HK2的体外培养,将细胞接种在培养瓶中,待细胞融合至80-90%时,更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0.1、0.5、1、2mg/L的培养基,培养24小时后,收集HK2细胞并提取mRNA、转化为cDNA,用RT-PCR检测HK2上ADAMTS13 mRNA的表达,并经凝胶成像行半定量分析。 结果: 1.NS患者血浆ADAMTS13抗原和VWF抗原的检测: ①与正常对照组比较,MN组和non-MN组患者血浆ADAMTS13抗原均降低(P0.05),VWF抗原均升高(P0.05),VWF/ADAMTS13抗原比值均升高(P0.01)。 ②MN组与non-MN组比较,血浆ADAMTS13抗原更低(P0.05),VWF抗原更高(P0.05),VWF/ADAMTS13抗原比值更高(P0.01)。 ③相关性分析显示:NS患者血浆ADAMTS13抗原与血清白蛋白(ALB)正相关(r=0.385,P0.01),而与24小时尿蛋白定量(r=-0.242,P0.05)、总胆固醇(TC)(r=-0.317,P0.01)和甘油三酯(TG)(r=-0.243,P0.05)负相关;血浆VWF抗原与ALB负相关(r=-0.287, P0.05),与纤维蛋白原(FIB)(r=0.366,P0.01)、D二聚体(r=0.255, P0.05)正相关;血浆ADAMTS13抗原与VWF抗原之间无明显相关性(P0.05)。 2.NS中的24例患者及10例对照者同时做了血浆ADAMTS13抗原、ADAMTS13活性和VWF抗原的检测: ①与正常对照组比较,MN组和non-MN组患者ADAMTS13活性均降低(P0.01),VWF抗原水平均升高(P0.05),VWF/ADAMTS13活性比值均升高(P0.01);MN组血浆ADAMTS13抗原降低(P0.01)、VWF/ADAMTS13抗原比值升高(P0.01),而non-MN组患者与正常者之间无差异(P0.05)。 ②MN组与non-MN组比较,ADAMTS13抗原更低(P0.05),VWF/ADAMTS13抗原比值更高(P0.05),而ADAMTS13活性、VWF抗原和VWF/ADAMTS13活性比值无差异(P0.05)。 ③相关性分析显示:NS患者ADAMTS13活性与VWF抗原(r=-0.393,P0.01)、FIB(r=-0.457,P0.05)呈负相关,ADAMTS13活性与ADAMTS13抗原、ADAMTS13抗原与VWF抗原之间均无明显相关性(P0.05)。 3.以空白对照HK2表达的ADAMTS13 mRNA量为参照1,则0.1、0.5、1、2mg/L浓度丹参多酚酸盐共培养后的HK2表达的ADAMTS13 mRNA依次为2.39、3.05、4.65和6.65,数据为重复2次实验的平均值。 结论: 1.NS患者血浆VWF水平升高,而ADAMTS13抗原、活性水平不同程度降低,可能是NS易于并发血栓形成的机制之一;而MN患者血浆VWF水平更高,ADAMTS13抗原、活性水平更低,可能是MN更易发生血栓形成并发症的机制之一。 2.NS患者血浆ADAMTS13抗原水平在一定程度上反映了NS的病变轻重程度,而ADAMTS13活性水平可作为判断血管内皮功能和血液高凝状态的指标之一。 3.HK2可表达ADAMTS13 mRNA,丹参多酚酸盐能增加HK2上ADAMTS13的表达,丹参多酚酸盐对肾小管上皮细胞上ADAMTS13的调节可能会影响肾脏局部循环的出、凝血状态,可能是丹参多酚酸盐的药理机制之一。


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