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枞酸钠抗日本血吸虫的初步研究及免疫抑制剂对青蒿琥酯抗日本血吸虫作用的影响

王文波  
【摘要】:第一部分枞酸钠对体外培养日本血吸虫成虫杀虫效果的观察 目的:观察枞酸钠对体外培养的日本血吸虫雄性和雌性成虫的杀灭效果。 方法:小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第5w肝门静脉灌注法收集两性成虫,用含不同浓度枞酸钠和青蒿琥酯的DMEM培养液连续培养3d,设空白对照,然后观察其死亡及活力降低情况。用Bradford标准曲线法测定药物对虫体蛋白质含量的影响。取虫体做盐酸卡红染色及石蜡切片,HE染色后观察。 结果:药物作用后,雄虫及雌虫的死亡率与活力降低率较对照组显著升高;同一时间段,同一药物浓度,体外培养雌性成虫对枞酸钠的敏感性远不如体外培养雄性成虫(P0.05);高、中浓度枞酸钠抗体外培养雄性成虫的效果优于高、中浓度青蒿琥酯;青蒿琥酯抗体外培养雌性成虫的效果优于枞酸钠。实验组雄性与雌性虫体的蛋白质含量较对照组均明显减少(P0.05)。染色结果显示药物作用后雄虫虫体肠管膨大,均出现黑色或褐色条带或斑点;雌虫肠管内容物分布不均,部分虫体卵巢形状不规则,着色不均匀。 结论:枞酸钠具杀灭体外培养日本血吸虫成虫的作用,且可能影响日本血吸虫成虫的蛋白质代谢。 第二部分枞酸钠小鼠急性毒性实验研究 目的:小鼠灌服枞酸钠后的急性毒性实验,观察枞酸钠的安全性。 方法:小鼠随机分4组:A1组(200mg/kg)、A2组(400mg/kg)、A3组(800mg/kg)和A4组(生理盐水),各实验组小鼠按对应剂量单次灌服枞酸钠,观察各组小鼠采食量、饮水量、体重变化情况;观察结束后,剖杀小鼠取主要脏器,测其脏体比,取主要脏器做石蜡切片,做病理学观察。另取小鼠随机分4组:B1组(200mg/kg)、B2组(400mg/kg)、B3组(800mg/kg)和B4组(生理盐水),各实验组小鼠按对应剂量连续灌服枞酸钠,观察方法同A组。 结果:单次和连续灌服不同剂量枞酸钠后,小鼠的采食量、饮水量和体重均有不同程度降低,给药后第3天采食量和饮水量恢复至或略高于给药前水平,体重也有不同程度增长。各组小鼠脏体比较对照组无显著差异(P0.05);各脏器组织结构正常,未发现明显异常。 结论:灌服枞酸钠后,除会短暂影响小鼠食欲与体重外,未见明显的毒性反应。 第三部分免疫抑制剂对青蒿琥酯抗日本血吸虫效果的影响 目的:观察免疫抑制剂对青蒿琥酯抗血吸虫童虫与成虫效果的影响。 方法:小鼠感染日本血吸虫尾蚴后,随机分4组:A1对照组、A2青蒿琥酯组(Art组)、A3氢化可的松组(HC组)、A4氢化可的松+青蒿琥酯组(HC+Art组)。感染后1d,HC组及HC+Art组注射氢化可的松,连续7d;感染后8d,Art组及HC+Art组灌胃给药青蒿琥酯混悬液。感染7w后剖杀小鼠,观察减虫和减卵效果;取肝右叶做石蜡切片,测量单卵肉芽肿直径。同样的分组方法(B1、B2、B3、B4)于感染后28d注射氢化可的松,35d灌胃青蒿琥酯;给药后24h,各组部分小鼠采血,测定血清中特异性抗SWAP抗体水平,并冲虫进行扫描电镜观察;其它小鼠处理方法同A组。 结果:较青蒿琥酯组,氢化可的松+青蒿琥酯组的减虫率显著降低,减卵率及单卵肉芽肿直径也存在不同程度的差异。较对照组,氢化可的松组的减虫率,减卵率及单卵肉芽肿直径均不同程度的降低。B3氢化可的松组及B4氢化可的松+青蒿琥酯组小鼠血清中特异性抗SWAP抗体水平显著降低(P0.05)。电镜结果显示,B4氢化可的松+青蒿琥酯组的虫体体表损伤情况较B2青蒿琥酯组减弱。 结论:由结果推测免疫抑制剂会对青蒿琥酯抗日本血吸虫童虫及成虫的效果产生一定的影响。


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