收藏本站
收藏 | 论文排版

脑源性神经营养分子在大鼠骨癌痛中的作用及其神经免疫机制

王丽娜  
【摘要】:基于我室改良的骨癌痛模型表明,脊髓P2X4特异性存在于小胶质细胞表面,且其参与骨癌痛大鼠痛觉过敏的形成。此外,近年来研究表明,脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是神经元-胶质细胞间"对话"的重要信号分子,这一神经痛后异常分泌的BDNF是由小胶质细胞上P2X4激活实现的。作为与神经痛相似又有其独特性的疼痛,骨癌痛状态下尚未发现存在类似BDNF介导的改变。据此,我们推测,脊髓小胶质细胞P2X4受体激活介导的BDNF释放可能参与骨癌痛痛敏的发生。本研究将结合在体、离体实验,采用siRNA、行为学,real-time PCR,Western Blot,ELISA,免疫组化等方法,通过分子水平(P2X4受体和BDNF)、细胞水平(小胶质细胞和神经元)以及整体水平(免疫和感觉系统)的"对话"来初探疼痛的神经免疫机制。 目的和方法探讨脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在大鼠骨癌痛发生中的作用及其神经免疫机制。应用Walker256乳腺癌细胞种植于大鼠一侧胫骨髓腔,建立骨癌痛模型,并通过疼痛行为学、影像学、病理组织学等评估肿瘤及疼痛发生发展情况;以下按照下述研究目的进行相应的实验分组,并分别采用疼痛行为学(n=10),Western blot(sn=4),Real-time PCR(n=4),免疫组织化学(n=4),小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA,n=4)技术以及磺基罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)方法(n=6)进行研究:①观察骨癌痛大鼠脊髓及背根神经节(DRG)BDNF表达产物的变化;②观察小胶质细胞抑制剂米络环素对骨癌痛大鼠脊髓BDNF表达的调节作用及其镇痛效应;③研究BDNF中和抗体对大鼠骨癌痛的镇痛效应及其下游磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(phosphorylation ofextracellular signal-regulated protein kinase1/2,p-ERK1/2)机制;④针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及转染复合物的毒性检测;⑤观察BDNFsiRNA对骨癌痛大鼠的镇痛效应及其可能机制。结果①骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角和DRG的BDNF mRNA及蛋白表达均增加,且峰值在造模后第6天(n=4, P 0.01);②早期(造模后第4~6天连续注射)鞘内注射米诺环素可明显减缓大鼠骨癌痛(机械撤爪阈值PWT及行走评分ambulatory scores)(n=10, P0.01);并减缓骨癌痛大鼠脊髓后角的OX-42(小胶质细胞激活标志物)和BDNF的表达;而晚期给药(造模后第10~12天连续注射)则无显著作用;荧光免疫组化显示,造模后第6天,骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角OX-42表达上调;且OX-42/BDNF双标产物也上调。③鞘内注射BDNF中和抗体减缓骨癌痛大鼠机械痛敏(机械撤爪阈值PWT)(n=10, P0.01);并显著减少脊髓BDNF和p-ERK1/2的蛋白表达(n=4,均P0.01);④LipofectamineTM20008μl复合100nmol siRNA(脂质体与siRNA比例为1:3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(n=6,P0.01),为最佳转染条件;与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNF siRNA1588(100nmol,脂质体与siRNA比例1:3)干扰小胶质细胞后,其mRNA和蛋白的相对表达量最低(n=6,P0.01)。⑤与对照组相比,早期(造模后第4~6天连续注射)鞘内注射BDNF siRNA可明显减缓大鼠骨癌痛(机械撤爪阈值PWT及行走评分ambulatory scores);而晚期给药(造模后第10~12天连续注射)也有镇痛作用,但是没有早期给药明显;单次给药后镇痛持续约24h,高峰在约4h左右;鞘内注射外源性BDNF的致痛作用可能通过BDNF-trkB途径介导。结论BDNF可能与其受体trkB结合后,通过下游的MAPK/ERK1/2途径参与大鼠骨癌痛的发生和维持。 目的和方法探讨脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是否可以通过调控神经元N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受体功能参与大鼠骨癌痛的发展。建立大鼠骨癌痛模型,并按照下述研究目的进行相应的实验分组,分别采用疼痛行为学(n=8),Real-time PCR(n=4),免疫组织化学(n=4)及小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA,n=4)技术进行以下研究:①观察骨癌痛大鼠脊髓及背根神经节(DRG)磷酸化的NMDA受体亚型NR1(p-NR1)表达产物的变化;②观察鞘内注射BDNFsiRNA对骨癌痛大鼠脊髓及背根神经节(DRG)BDNF及p-NR1表达的调节作用及其镇痛效应;③观察BDNF是否通过TrkB受体调控NMDA受体功能。结果①骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角和DRG的p-NR1mRNA及蛋白表达均增加,且峰值在造模后第9天(n=4, P 0.01);②与对照组相比,造模后第9天,鞘内注射BDNF siRNA(造模后第4~6天连续注射)可明显减少骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角和DRG的BDNF和NR1mRNA表达,并减少p-NR1蛋白表达(n=4,P0.01);③正常大鼠鞘内注射NMDA可诱发痛行为反应,持续155s (n=8,P 0.01);BDNF受体trkB的中和抗体trkB-IgG预注射可明显减缓NMDA诱发的痛行为反应(n=8,P 0.01);而BDNF则可增强该NMDA诱发的痛行为反应。结论BDNF可能与其受体trkB结合后,通过调控神经元NMDA受体功能参与大鼠骨癌痛的发展。 目的和方法探讨小胶质细胞上P2X4受体(P2X4R)激活是否可以介导脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的释放及参与大鼠骨癌痛的发生。体外培养大鼠小胶质细胞,并建立大鼠骨癌痛模型,按照下述研究目的进行相应的实验分组,分别采用疼痛行为学(n=10),Western blots(n=4), Real-time PCR(n=4),免疫组织化学(n=4)及ELISA方法(n=4)进行以下研究:①针对小胶质细胞上P2X4R表达的siRNA体外筛选;②观察体外小胶质细胞上P2X4R的激活是否可以通过P38MAPK机制介导BDNF的分泌和释放;③观察骨癌痛大鼠脊髓P2X4R、磷酸化的p38MAPK(p-p38)表达变化;P2X4R/p-p38、P2X4R/BDNF共表达及BDNF、TNFα、IL-1β分泌的变化;④观察鞘内注射P2X4siRNA对骨癌痛大鼠P2X4R、p-p38表达及BDNF、TNFα、IL-1β分泌的调节作用及其镇痛效应。结果①与对照组相比,转染后24h,小胶质细胞P2X4R mRNA表达明显减少;转染后48h,P2X4R蛋白表达也较对照组明显减少(n=4,P 0.01);②ATP可能可以通过p38的激活,介导体外培养小胶质细胞的BDNF合成和释放,且该作用在ATP刺激后60min达到高峰(n=4,P 0.01),并依赖于P2X4R;③骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角的P2X4R蛋白和mRNA表达均增加,且呈现进行性增加趋势,峰值在造模后第18天(n=4,P0.01);骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角的p-p38蛋白表达,以及BDNF, TNFα和IL-1β的分泌均明显增加,且峰值在造模后第6天(n=4,P 0.01);荧光双标免疫组化显示,造模后第6天,骨癌痛大鼠L4~6脊髓后角P2X4R/BDNF和P2X4R/p-p38双标产物均明显上调;④与对照组相比,造模后鞘内注射P2X4R siRNA(第4~6天连续注射)可明显减缓大鼠骨癌痛(机械撤爪阈值PWT及行走评分ambulatory scores)(n=10,P 0.01);并可明显减少骨癌痛大鼠p-p38,BDNF, TNFα和IL-1β表达(n=4,P 0.01)。结论小胶质细胞上P2X4R激活后可能可以通过P38MAPK机制介导BDNF的释放并参与大鼠骨癌痛的发生。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李善华,卞丽香,吉孟香;济南市护理人员癌痛知识调查分析[J];山东医科大学学报(社会科学版);2000年04期
2 E.Heidemann,胡国清;癌痛的治疗[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2000年02期
3 杜华,严小蓉;影响癌痛治疗因素的分析及对策[J];现代护理;2001年03期
4 南方;外治癌痛方药集[J];家庭中医药;2003年04期
5 倪家骧;癌痛的介入治疗[J];中国疼痛医学杂志;2004年04期
6 李佩文;中药防治癌痛前景广阔[J];实用中医内科杂志;1994年04期
7 田维君,宋祥玖,罗宇;癌痛的中医治疗概述[J];武警医学;1994年05期
8 党文,杨介宾;针刺治疗胃癌痛的临床研究[J];中国针灸;1995年S2期
9 秦子河;癌症疼痛内外治疗68例[J];江西中医药;1995年S2期
10 徐建华,侯媛淑;曲马多对癌痛的临床镇痛效果观察[J];中国医师杂志;1996年08期
11 刘德生;如何提高“三级阶梯止痛法”的疗效与安全[J];实用疼痛学杂志;1997年04期
12 闫爱兰,闫玉红;癌痛散合补原汤治疗癌性疼痛46例临床观察[J];中原医刊;2000年03期
13 何玉梅,贾立群;中药外治法在癌痛治疗中的应用[J];中日友好医院学报;2000年02期
14 周庭礼;癌痛病人使用麻醉性镇痛药的误区分析[J];中国药物滥用防治杂志;2003年04期
15 林铎;针灸治疗癌痛举要[J];中医药学刊;2004年03期
16 席宁;癌症疼痛处理的新观点(下)[J];四川肿瘤防治;1995年01期
17 杨德恕,杨建东;痛点阻滞加硬膜外注入吗啡对癌痛镇痛[J];天津医药;1997年11期
18 林小武;癌性疼痛的中医药治疗近况[J];华夏医学;1998年05期
19 张广超,王瑛,阎杰,赵强,曹嫣娜,李璋林;儿童癌痛评价及治疗的临床研究[J];中国肿瘤临床;2002年12期
20 冯潭溪,杨东红;对基层医院加强癌痛控制教育的必要性和紧迫性[J];现代肿瘤医学;2003年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈伟;韦若梨;;癌痛控制的现状与体会[A];第六届中国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2010年
2 罗健;李倩;;关于中国癌痛综合治疗与药物治疗进展及发展的几点思考[A];第六届中国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2010年
3 杨萍;孙丽秋;路潜;庞冬;金三丽;丁玥;;癌痛病人生活质量状况及其相关因素研究[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
4 戴宇翃;于世英;;癌痛患者焦虑抑郁的筛查及相关因素的初步调查[A];第七届全国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2011年
5 付兰香;;止癌痛怎么样正确用药[A];河南省手术室护理学术会议暨围手术期安全护理高级研修班论文集[C];2009年
6 ;北京市癌痛状况调查[A];第七届全国癌症康复与姑息医学大会大会论文集和专题讲座[C];2011年
7 张弓;;2010年NCCN成人癌痛临床实践指南解读[A];湖北省第21届肿瘤学术大会论文汇编[C];2011年
8 缪雪蓉;;Nav1.8在骨癌痛大鼠双侧背根神经节神经元上表达降低[A];2010中华医学会全国麻醉学术年会论文汇编[C];2010年
9 李玉芬;;50例癌痛病人家庭用止痛药的调查与护理[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2002年
10 魏青;王昆;;丁丙诺啡含片治疗晚期癌痛初始剂量的临床疗效观察[A];第四届全国康复治疗学术大会论文摘要汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王丽娜;脑源性神经营养分子在大鼠骨癌痛中的作用及其神经免疫机制[D];苏州大学;2012年
2 潘海莉;大鼠骨癌痛外周机制的研究:溶血磷脂酸调制TRPV1电流及其信号通路分析[D];复旦大学;2010年
3 姚明;大鼠脊髓胶质细胞参与骨癌痛的机理及鞘内丙戊茶碱的抗痛敏效应[D];苏州大学;2007年
4 陈莎莎;重构型自发活化Caspase3基因的构建及其在骨癌痛大鼠的镇痛效应研究[D];华中科技大学;2010年
5 张祥;促红细胞生成素治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的观察[D];复旦大学;2010年
6 张巍;小胶质细胞和星形胶质细胞在多巴胺能神经元变性和保护中的可塑性变化[D];大连医科大学;2004年
7 汪琦;SDF-1α诱导小胶质细胞定向趋化对阿尔茨海默病Aβ清除作用的研究[D];华中科技大学;2011年
8 李婷婷;脊髓MAPK参与大鼠转移性骨癌痛的机制[D];复旦大学;2010年
9 刘明朝;小胶质细胞活化在铅诱导学习记忆损伤中的作用及机制探讨[D];第四军医大学;2010年
10 渠文生;小胶质细胞EGFR通路调控对脊髓损伤与修复的影响及机制研究[D];华中科技大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 董文艳;骨转移瘤患者放疗缓解癌痛的程度与α-唾液淀粉酶活性的相关性研究[D];山东大学;2011年
2 赵倩倩;胫骨癌痛大鼠痛觉敏化的形成及其脊髓机制[D];山东大学;2012年
3 肖柳;癌痛贴毒性实验及三种剂型的临床研究[D];湖北中医药大学;2012年
4 梅喜;NR2B在骨癌痛小鼠的前扣带回和脊髓中的分布与表达[D];中南大学;2010年
5 柴玫;脑下垂体阻滞治疗癌痛和非癌顽痛效果与内分泌变化相关性的临床研究[D];延边大学;2004年
6 张吉娟;BV2细胞在不同损伤神经环境下CD200R表达的研究[D];中国医科大学;2010年
7 尹云霞;小胶质细胞在SOD1-G93A转基因小鼠腰髓及运动皮层中的变化[D];河北医科大学;2011年
8 王丽卿;丙泊酚减轻脑出血大鼠早期脑水肿和抑制其小胶质细胞激活[D];浙江大学;2011年
9 张岩;甲基苯丙胺中毒大鼠相关脑区EP_2受体及小胶质细胞表达的研究[D];昆明医学院;2011年
10 杨丽玲;JAK/STAT途径介导Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α释放的研究[D];山东大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国医学科学院肿瘤医院 罗健博士;认识癌痛[N];北京日报;2001年
2 湖南省肿瘤医院 赵江洪 王明德;癌痛需要综合治[N];大众卫生报;2002年
3 魏文;“无痛过年”推广癌痛规范化处理[N];工人日报;2009年
4 本报记者 白毅;癌痛用药莫怕“成瘾”[N];中国医药报;2009年
5 吴世凯;治疗老年癌痛患者更要重视合理用药(一)[N];农村医药报(汉);2009年
6 解放军307医院乳癌科 吴世凯;治疗老年癌痛患者更要重视合理用药[N];中国医药报;2009年
7 本报记者 邹左功;别让癌痛走近[N];健康报;2001年
8 本报记者 衣晓峰 通讯员 李华虹 刘乙辉;对抗癌痛 提高生活质量[N];中国中医药报;2008年
9 天津市肿瘤医院除痛科主任 王昆 整理 李运红 胡颜;癌痛和肿瘤应同步治疗[N];健康报;2008年
10 中日友好医院全国疼痛诊疗研究中心博士 司马蕾;关注癌症及癌痛相关性疲劳[N];中国老年报;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978