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脊髓损伤后自噬的表达及高压氧治疗对其影响的实验研究

刘明  
【摘要】:目的: 1.研究大鼠脊髓损伤后脊髓组织自噬表达变化的情况及其表达的时程变化,为脊髓损伤的发生机制研究提供新依据。 2.研究高压氧治疗对大鼠脊髓损伤后脊髓组织自噬表达的影响,探讨高压氧治疗脊髓损伤的机制。 方法: 选取72只健康SD大鼠,雌雄不限,体重250±30g,随机分为假手术组(n=8)、单纯脊髓损伤组(n=32)、高压氧治疗组(n=32)。假手术组只行椎板切除不损伤脊髓组织;单纯脊髓损伤组行椎板切除术后用改良Allen打击法建立大鼠脊髓损伤模型,不予高压氧治疗;高压氧治疗组行椎板切除术后用改良Allen打击法建立大鼠脊髓损伤模型后予高压氧治疗,高压氧采用2ATA,吸入纯氧,1次/天,每次100分钟,连续治疗7天。观察期间,各组在术前及术后8h、1d、3d、5d、7d采用BBB评分法评价大鼠后肢运动功能变化情况;在术后8h、1d、3d、7d时间点采用Western Blot法检测大鼠脊髓损伤后自噬相关蛋白LC3的表达情况并在透射电镜下观察其超微结构、自噬体形成的情况。 结果: 1.高压氧治疗组较单纯脊髓损伤组自术后第一天起在BBB评分上明显升高,在7d时间点上其差异有统计学意义(P0.05)。 2.假手术组自噬相关蛋白LC3低水平表达,脊髓损伤组和高压氧治疗组中自噬相关蛋白LC3表达较假手术组明显升高,各时间点差异均有统计学意义(P0.05);同一时间点,高压氧治疗组较单纯脊髓损伤组LC3的表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。 3.透射电镜下,假手术组神经元细胞核膜完整,胞质中细胞器形态分布和数目正常,未见自噬体;单纯脊髓损伤组可见神经元细胞水肿,大量线粒体肿胀、空泡化,细胞核形不规则,在损伤的脊髓组织的神经细胞核周围可见大量自噬体;高压氧治疗组神经细胞轻度肿胀,细胞核周围也可见少量自噬体。 结论: 1.大鼠正常脊髓组织中自噬低水平表达,以维持细胞稳态为主,脊髓损伤后细胞自噬机制被诱导激活,自噬相关蛋白LC3的表达上升,在脊髓损伤后3d时达高峰,7d时仍有较高表达,表明脊髓损伤后细胞自噬被诱导上调引发自噬过程加剧,加重神经细胞损伤及功能损害,说明自噬在脊髓损伤过程中可能发挥重要作用。 2.高压氧治疗能够降低大鼠脊髓损伤后自噬相关蛋白LC3的表达,表明高压氧治疗能够下调脊髓损伤后细胞自噬水平,减少神经细胞的损伤,对脊髓损伤起保护作用,表明抑制脊髓损伤后细胞自噬可能是高压氧治疗脊髓损伤的重要机制之一。


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