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CD133分子在儿童B系急性淋巴细胞白血病表达的意义及其生物学特性的初步研究

张艳兰  
【摘要】:一、儿童B系急性淋巴细胞白血病CD133分子表达的意义 目的:探讨急性淋巴细胞性白血病(Acute lymphoblastic leukemia ALL)患儿诱导化疗前后骨髓单个核细胞CD133-1、CD133-2两种分子的表达与临床预后指标的相关性。 方法:选取初诊ALL患儿59例,流式细胞术检测其骨髓单个核细胞CD133-1和CD133-2的表达比例。 结果:1)初诊B-ALL患儿CD133-1、CD133-2的表达与其年龄、性别、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、LDH水平、细胞遗传学改变、融合基因、危险等级、完全缓解(CR)率及白细胞分化抗原CD38、CD58和CD66c等表达均无相关性(P0.05)(其中4例T-ALL因例数太少,无统计学意义)。2)55例B-ALL中,CD133-1表达阳性者21例(占38.2%),CD133-2表达阳性30例(占54.5%),二者表达阳性比例有显著差异(P<0.05)。3)B-ALL组CD133两种亚型分子的表达与CD34表达虽然有显著性差异(P<0.05),但无相关性(P>0.05); 结论:1)初诊B-ALL患儿CD133-1、CD133-2的表达与其性别、年龄、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例、LDH水平、危险等级、融合基因、细胞遗传学改变、CR率、CD38、CD58、及CD66c等表达均无相关性。2)B-ALL患儿CD133-2的表达比例明显高于CD133-1。3)CD133表达与CD34表达无相关性。 二、儿童B系ALL来源的CD133+细胞生物学特性的初步研究 目的:体外分离儿童B-ALL原代白血病细胞CDl33+CD19+、CDl33+CD19-等亚群细胞,初步探讨其体外生物学特性。 方法:选取4例CD133表达阳性的B-ALL患儿,经免疫磁珠法(MACS)分选出CDl33+CD19+与CDl33+CD19-细胞,并用流式细胞仪对所分选细胞的CD133-2表达进行鉴定;分选后的CDl33+CD19+与CDl33+CD19-两组亚群细胞,分别接种于含干细胞因子(SCF)、白细胞介素-3(IL-3)和白细胞介素-7(IL-7)的无血清培养基中,悬浮培养4-7周后,流式细胞术检测培养细胞的CDl33、CD19及CD34的表达,RT-PCR检测其融合基因的表达。同时以MACS分选的CD133-细胞作对照。 结果:1)MACS法分选B-ALL原代白血病CDl33+CD19+与CDl33+CD19-两组亚群细胞,分选后细胞总回收数为(76.9±25.63)×106,较分选前细胞总数[(99.0±21.07)×106]低,细胞总回收率为77.7%,但二者之间无显著差异(P0.05);流式细胞术检测所分选的细胞的CD133-2表达比例,示两者平均比例分别为(77.5±13.61)%、(76.83±5.58)%。2)CD133+CD19+、CD133+CD19-两组亚群细胞在无血清培养基中悬浮培养平均5周(4-7周),细胞生长良好,可形成克隆细胞球;通过在4个不同时间点(d0、d14、d28、培养结束前)对两组细胞进行计数,提示CD133+CD19+亚群细胞增殖速度更快,且培养至14天左右细胞即进入增殖高峰期,上述4个时间点细胞数差异有统计学意义(P0.05)。而CD133-CD19+、CD133-CD19-两组原代细胞亚群则未形成克隆细胞球,且细胞增殖缓慢,1周内无明显细胞增殖,以后逐渐凋亡。3)CD133+CD19+、CD133+CD19-两组亚群细胞经体外无血清培养4-7周后,经流式细胞术检测,CDl33、CD19及CD34均无表达。4)2例初诊时有融合基因表达异常(分别TEL/AML1、MLL/AF4表达阳性)的B-ALL患儿,分别经无血清培养5、7周后融合基因仍表达阳性。 结论:1)免疫磁珠分选技术能够成功分离纯化儿童B-ALL中CD19+CDl33+与CDl33+CD19-两组亚群细胞;2)含不同细胞因子的无血清培养基能有效支持B-ALL的CD133+细胞体外中、长期培养并维持其生物学特性;3)B-ALL中CDl33+较CDl33-细胞具有更强的体外增殖潜能,CD133-2+CD19+细胞亚群可能具有白血病干细胞特性。


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