收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

β-TcP/pluronicF-127复合支架结合BMSCs修复兔关节骨软骨缺损的实验研究

朱伟  
【摘要】:第一部分:凋亡相关基因在骨关节炎软骨中的表达及意义目的:研究骨关节炎中细胞凋亡情况,凋亡相关基因(FAS、BCL-2、caspases3)等在骨关节炎中的表达及意义,从而在一定程度阐明骨关节炎的发病机理。方法:通过Hulth法建立兔关节炎模型取得软骨标本,免疫组化S-P法检测凋亡相关基因(FAS、BCL-2、caspases3)在骨性关节炎软骨细胞中的表达情况,TUNEL法检测骨性关节炎软骨细胞凋亡情况,并探讨凋亡相关基因(FAS、BCL-2、caspases3)的表达与软骨细胞凋亡程度之间的相关性。结果:术后8周时关节软骨呈现典型的0A病理特征。实验组和对照组关节软骨细胞凋亡指数的差异具有显著性(P0.05);在软骨细胞中FAS蛋白表达实验组阳性率高于对照组,差异具有显著性(P0.05);实验组关节软骨中软骨细胞凋亡程度与FAS蛋白的表达呈正相关,差异具有显著性(P0.05);在关节软骨细胞中bcl-2蛋白的表达实验组阳性率低于对照组,但差异没有显著性(P0.05);实验组关节软骨中软骨细胞凋亡程度与bcl-2蛋白的表达呈负相关,差异具有显著性(P0.05); caspase-3在实验组的软骨细胞阳性率高于对照组,差异具有显著性(P0.01);实验组关节软骨中软骨细胞凋亡程度与caspase3的表达呈正相关,差异具有显著性(p0.05);结论:1.Hulth法可制作较好的骨关节炎动物模型。2.关节软骨细胞的凋亡明显增加可能是关节炎形成的重要原因之一。3.骨关节炎中FAS,BCL-2,caspase3等凋亡相关基因的表达与细胞凋亡程度具有明显相关性,表明表达其与骨关节炎有密切关系。 第二部分兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外诱导分化 目的:探索兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外诱导分化的方法,研究其体外增殖,分化能力。探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值。方法:采用密度梯度离心与全骨髓培养结合的方法分离、纯化兔骨髓间充质干细胞,体外培养;以流式细胞仪检测BMSCs的表面抗原表达;在相差显微镜下观察细胞形态并绘制生长曲线;分别体外诱导第3代细胞向软骨细胞和骨细胞分化,对诱导分化为骨细胞进行碱性磷酸酶染色、VonKossa染色和I型胶原和骨钙素免疫组化染色检测鉴定,对诱导分化为软骨细胞进行甲苯胺蓝染色、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色检测鉴定。结果:经密度梯度离心结合全骨髓培养法分离所得到的细胞形态均一,呈长梭形或纺锤形。BMSCs增殖能力活跃,流式细胞仪检测BMSCs显示CD105,CD44,表达阳性,CD34和CD45表达为阴性。成骨诱导培养后,可见碱性磷酸酶染色、VonKossa染色、I型胶原和骨钙素免疫组化染色阳性;向软骨细胞诱导分化后,细胞甲苯胺蓝染色、番红0染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色为阳性。结论:密度梯度分离法与全骨髓培养法结合能理想的分离、纯化BMSCs; BMSCs在体外具有良好的增殖潜能,BMSCs在诱导剂作用下能表现出成骨细胞和软骨细胞生物学特性,是组织工程理想的种子细胞。 第三部分BMscs/β-TcP/pluronicF-127复合支架修复兔关节软骨缺损的实验研究 目的:研究β-TcP/pluronicF-127复合支架结合BMSCs修复兔膝关节骨软骨缺损的效果,探讨β-TcP/pluronicF-127复合支架做为组织工程支架承载BMSCs修复骨软骨缺损的可行性。方法:分离培养兔自体MSCs,将36只健康新西兰大白兔并随机分为三组(A组、B组、C组),于股骨髁关节面制备关节软骨缺损模型(每孔直径5mm、深度4-5mm)。A组、B组关节缺损处分别植入BMscs/β-TcP/pluronicF-127.、BMscs/β-TcP复合支架,C组为空白组不作处理。术后3、6个月分别取材,进行缺损区组织学、组织化学和免疫组织化学分析。A组、B组和正常关节标本进行生物力学测试。结果:A组能形成丰富的透明软骨样修复组织,与周围组织整合良好;B组以不成熟透明软骨;C组无修复组织。总的修复效果A组最理想,C组最差。生物力学测试得出: B组和C组标本的蠕变时间和应力松弛时候较正常关节均缩短,杨氏模量较正常关节偏小,但差异均无统计学意义。结论: BMSCs是良好的组织工程种子细胞,β-TcP/pluronicF-127复合支架是良好的生物工程支架,能承载BMSCs至缺损区修复骨软骨缺损缺损,修复效果理想。BMscs/β-TcP/pluronicF-127复合支架材料构建组织工程软骨,是—种修复关节软骨缺损行之有效的方法。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 彭丹!410011长沙,孙材江!410011长沙,周江南;一氧化氮在实验性骨关节炎软骨细胞凋亡中的作用[J];中华风湿病学杂志;2000年04期
2 张洪;张阳德;张宗久;赵明钢;王大平;熊建义;欧阳侃;;α2M在骨关节炎动物模型中的表达及意义[J];中国现代医学杂志;2008年01期
3 朱桂全;梁新华;;低氧诱导因子-1α在骨关节炎发病机制中的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2008年03期
4 许鹏,靳卫章,郭雄;骨关节病关节软骨细胞凋亡的研究进展[J];实用老年医学;1999年06期
5 沈霖,沈耀,杨述华;丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响[J];中国中医骨伤科杂志;2002年05期
6 向川;软骨细胞凋亡与骨关节炎[J];国外医学.免疫学分册;2003年02期
7 张洪;张阳德;王大平;熊建义;欧阳侃;;uPA/uPAR在骨关节中的表达及与软骨细胞凋亡的关系[J];中国现代医学杂志;2007年23期
8 赵瑜;冯齐凤;朱祝生;刘日光;;中药补肾方对体外培养软骨细胞影响[J];时珍国医国药;2008年04期
9 邢建民;李璐;郭亮;;转化生长因子-β_1对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用[J];中国药物与临床;2010年01期
10 冯剑颖;骨关节病时关节软骨细胞凋亡的研究进展[J];现代口腔医学杂志;2003年02期
11 方锐;孟庆才;吕刚;;骨性关节炎软骨细胞的凋亡和中药干预[J];新疆中医药;2007年02期
12 张梅,李平,汪健,翟志敏,胡闻,陈朝晖;软骨细胞三种凋亡模型的建立[J];上海实验动物科学;2004年01期
13 张洪;张阳德;王大平;熊建义;欧阳侃;;糖蛋白YKL-40在骨关节炎中的表达[J];中国现代医学杂志;2007年24期
14 张洪;张阳德;王大平;熊建义;欧阳侃;;Caspase-3、XIAP在骨关节炎中的表达及意义[J];中国现代医学杂志;2008年03期
15 陈伟;梁新华;;热休克蛋白及其在骨关节炎中的研究进展[J];口腔颌面外科杂志;2008年02期
16 廖鸿;何江涛;毛显法;;过氧化氢对关节软骨细胞过氧化损伤效应及中药黄芪干预实验研究[J];重庆医学;2009年02期
17 刘恒;刘超;曹永平;;软骨细胞线粒体功能异常在关节软骨早期退变中的作用[J];中国矫形外科杂志;2011年08期
18 刘耀升,毕大卫;骨关节炎细胞凋亡与一氧化氮的调控作用[J];中国骨伤;2001年09期
19 王大平;欧阳侃;熊建义;刘黎军;刘建全;;Caspase-6,8在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义[J];深圳中西医结合杂志;2006年06期
20 欧阳侃;王大平;熊建义;刘黎军;刘建全;;Bax、Bcl-XL在骨关节炎软骨及滑膜中表达的实验研究[J];深圳中西医结合杂志;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 沈霖;杨艳萍;;维甲酸诱导的软骨细胞凋亡动态观察[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
2 廖俊琳;王声;刘日光;;双醋瑞因对IL-1β诱导软骨细胞凋亡的影响和作用机制的研究[A];贵州省中西医结合学会骨伤分会第二次学术交流会议论文汇编[C];2011年
3 沈霖;沈耀;杨述华;;丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
4 何成奇;;脉冲电磁场对去势大鼠股骨软骨细胞凋亡及MMP13表达的影响[A];中国康复医学会运动疗法分会第十一届全国康复学术大会学术会议论文摘要汇编[C];2011年
5 梁祖建;;补肾活血方调控Wnt/β-catenin信号通路保护关节软骨的机制研究[A];第八届博士生学术年会论文摘要集[C];2010年
6 张玮;张杨;白人骁;李秀兰;;骨性关节炎的体液代谢环境对软骨修复影响的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会第30次学术年会暨生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2010年
7 镇东鑫;镇兰芳;张仕玉;;马钱子药理毒理研究最新进展及临床指导[A];全国有毒中药在风湿病治疗中的应用与研究进展学习班讲义[C];2010年
8 王蔼平;;骨质糖浆配合西药治疗OA 92例临床研究[A];全国第八届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2010年
9 王蔼平;;骨质糖浆配合西药治疗OA 92例临床研究[A];首届中国中西医结合风湿病西北学术会议暨培训班论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 叶春婷;Caspase 3 siRNA抑制软骨细胞凋亡及治疗骨关节炎研究[D];暨南大学;2009年
2 高宏;NOS抑制剂L-NMMA对关节软骨损伤保护作用的实验研究[D];四川大学;2006年
3 胡建中;骨关节炎发病机理及治疗的系列研究[D];中南大学;2006年
4 芦北极;L-单甲基—精氨酸对减少关节软骨细胞凋亡的机制研究[D];苏州大学;2012年
5 张梅;马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响[D];北京中医药大学;2003年
6 李勇;鹿茸多肽增强体外培养兔关节软骨细胞代谢的实验研究[D];福建中医学院;2003年
7 欧云生;高选择性NSAIDs对大鼠实验性骨关节炎关节软骨代谢影响的研究[D];重庆医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王毓幸;关节腔内注射HA对兔膝内侧半月板切除术后OA关节软骨细胞凋亡的作用[D];苏州大学;2010年
2 颜益红;超声波和运动疗法对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡,BCL-2和MMP-13的影响[D];中南大学;2012年
3 吴东迎;人参皂甙Rg1拮抗大鼠关节软骨细胞凋亡的研究[D];南京医科大学;2013年
4 郑佳璇;电针对大鼠颈椎病模型软骨细胞凋亡及PI3K/Akt的影响[D];福建中医药大学;2014年
5 陈青植;蛋白激酶B与蛋白激酶C在人骨性关节炎软骨组织中的表达研究[D];福建医科大学;2010年
6 王政光;健膝壮骨方对大鼠骨性关节炎软骨细胞凋亡及其调控基因P53、Bcl-2表达作用的影响[D];浙江中医药大学;2010年
7 田学忠;iNOS在肢体IR后关节损伤中的作用及组织芯片技术的初步应用[D];泰山医学院;2005年
8 岳立群;Apigenin (Api)抑制NO、iNOS产生和软骨细胞凋亡的在体研究[D];中国医科大学;2004年
9 肖会;苗药组方熏洗对家兔早期膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡与增殖影响的实验研究[D];贵阳中医学院;2012年
10 高航飞;在骨性关节炎发病中AQP-1表达量的变化与软骨细胞凋亡的相关性研究[D];南京医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978