肝癌的抑癌基因异常甲基化检测及其临床意义研究

【摘要】：目的：研究肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织中的GSTP1、P16、RIZ1、RASSF1A4种基因启动子区域甲基化状态的表达差异，并探讨其在肝癌发生中的作用，以期能筛选出用于肝癌临床早期诊断的分子生物学标志物。 方法：运用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR，MSP）技术，分别检测35例肝癌组织及其相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中4种候选抑癌基因（GSTP1、P16、RIZ1、RASSF1A）启动子区域的甲基化表达情况，并结合临床病理资料（性别、年龄、肿瘤大小、组织病理分化程度、AFP是否阳性，是否存在肝硬化、是否存在包膜侵犯、是否转移等）进行分析。 结果：在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到GSTP1基因启动子区的甲基化率分别是57.1%(20/35)，25.7%(9/35)，0%(0/20)；P16基因启动子区甲基化率分别是54.3%(19/35)，37.1%(13/35)，0%(0/20)；RIZ1基因启动子区甲基化率分别是68.6%(24/35)，14.3%(5/35)，0%(0/20)；RASSF1A基因启动子区甲基化率分别是88.6%(31/35)，74.3%(26/35)，10%(2/20)。其中癌组织中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均显著高于相应的癌旁组（P＜0.01）和正常对照肝组织（P＜0.01）。而癌组织中p16、RASSF1A启动子区甲基化率高于癌旁组织，但二者无统计学意义（P＞0.05），但明显高于正常对照肝组织（P＜0.01）。在上述4个肝癌甲基化特异性基因与临床病理资料的相关分析中，在肝癌组织中肿瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化阳性率明显高于无包膜侵犯者，差异有统计学意义（P＜0.05）；乙肝表面抗原(HbsAg)阳性的肝癌患者P16基因甲基化阳性的比率要显著高于HbsAg阴性者，二者有统计学差异（P＜0.05）；而RIZ1、RASSF1A与临床病理资料间均没有显著的统计学相关意义（P＞0.05）。 结论：1.在肝癌的癌变过程中，肿瘤相关抑癌基因GSTP1、P16、RIZ1、RASSF1A启动子区的甲基化作为常见的表观遗传学改变，不仅发生在肿瘤形成之后，它还是一个早期频发事件，并且在肝细胞的恶性转化过程中逐步积累。 2.RIZ1、GSTP1基因甲基化状态具有肝癌特异性，可较好的区分肝癌与非癌，可作为临床肝癌辅助诊断的候选标志物，用以检测病人患HCC的风险。 3.慢性HBV感染可能是导致P16甲基化而失活的原因，GSTP1基因启动子甲基化可能与肝细胞癌的侵袭性有关。 4.MSP是检测基因启动子区CpG岛甲基化状态的一种简单、敏感和特异的方法，可用于肝癌的辅助诊断。