POU5F1B通过激活AKT，miR-660通过抑制PPP2R2A促进肝细胞癌的增殖

【摘要】：第一部分:POU5F1B通过激活AKT促进肝细胞癌的增殖目的:检测POU5F1B在肝细胞癌(HCC)中的表达,并探究其在促进肝细胞癌增殖过程中的调控机制。方法:使用TCGA数据库来分析POU5F1B与肝细胞癌的发展的相关性。通过MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验,检测POU5F1B的过表达对肝癌细胞的增殖影响及其对AKT的的调控。收集贵州医科大学附属医院的肝细胞癌患者及正常的肝组织,通过蛋白质印迹法及实时荧光PCR实验检测组织中POU5F1B的表达水平与Cyclin D1、p21和p27的表达水平,及AKT磷酸化水平的相关性。结果:TCGA数据库分析显示POU5F1B在肝癌细胞和组织中表达明显的上调,高表达POU5F1B的肝癌患者的总生存时间明显低于低表达POU5F1B的肝癌患者。MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验的结果显示POU5F1B的过表达可促进肝癌细胞的增殖,而敲低POU5F1B会抑制肝癌细胞的增殖。且POU5F1B可以激活AKT,在肝癌细胞中过表达POU5F1B的情况下抑制AKT,相比于单纯过表达POU5F1B的细胞,可以明显抑制肝癌细胞的增殖,说明POU5F1B是通过激活AKT促进肝癌细胞增殖。在获取的肝癌组织样本中检测发现,POU5F1B的表达水平与Cyclin D1的表达水平呈正相关,而与p21和p27的表达水平及AKT磷酸化水平呈负相关。结论POU5F1B通过激活AKT促进肝癌细胞增殖,可以为肝细胞癌的治疗提供新的靶点。第二部分:miR-660通过抑制PPP2R2A促进肝细胞癌的增殖目的:检测miR-660在肝细胞癌(HCC)中的表达,并探究其在促进肝细胞癌增殖过程中的调控机制。方法:使用TCGA数据库来分析miR-660与肝细胞癌的发展的相关性。通过实时荧光PCR实验检测了miR-660在多种肝癌细胞及组织中的表达。通过MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验,检测miR-660的过表达对肝癌细胞增殖的影响及对PPP2A2R的调控。通过萤光素酶报告基因测定,实时荧光PCR实验和蛋白质印迹法检测miR-660对PPP2A2R的调控。通过实时荧光PCR实验检测miR-660与CCND1和p21表达的关系。结果:TCGA数据库分析显示miR-660在肝癌细胞和组织中表达明显上调。实时荧光PCR实验发现miR-660在多株肝癌细胞中表达上调。MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验的结果显示miR-660的过表达可促进肝癌细胞的增殖,而敲低miR-660敲低会抑制肝癌细胞的增殖,且miR-660可以抑制PPP2R2A的水平,荧光素酶实验检测到miR-660与PPP2R2A的3’-UTR直接结合。实时荧光PCR实验的结果显示miR-660抑制p21表达并促进CCND1表达。通过软琼脂生长实验和Brd U掺入法实验证明敲低miR-660后同时敲低PPP2R2A可以促进Hep G2增殖。结论:miR-660可通过靶向PPP2R2A促进肝癌的增殖,可能成为肝癌治疗的新靶点。