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胸腺修饰预处理受体对异种小动物心脏移植免疫排斥反应的作用研究

倪斌  
【摘要】: 目的:在非协调性异种小动物豚鼠-大鼠心脏移植模型中,通过异基因抗原胸腺修饰途径来探讨T细胞在异种移植延迟性免疫排斥中的作用,探索诱导异种移植T细胞中枢性耐受的可行性。 方法:将供体三色豚鼠和受体SD大鼠随机分成心脏移植组和腹腔注射组,其中心脏移植组再分为空白组(O组):仅行异种异位心脏移植(d0),在心脏移植前和后对受体不作任何处理;对照组(A组):在进行心脏移植前20~24小时,大鼠腹腔内注射CVF 0.4mg/kg,术后隔24小时追加CVF 0.4mg/kg一次:照射组(B组):心脏移植前17天(d-17)接受3.5Gy全身照射,余处理同A组;照射+胸腺注射组(C组):照射后3天(d-14)大鼠胸腺内注入豚鼠脾淋巴细胞(5×10~6个/只),余处理同B组。其中O组取供受体各8只,A、B、C三组取供受体各5只。分别于照射后第3(d-11)、第7(d-7)、第10(d-4)、和第14(d0)天连续检测大鼠外周血淋巴细胞的变化情况,以观察照射对大鼠外周血淋巴细胞的影响情况;流式细胞仪法在d0检测大鼠外周血CD_4~+、CD_8~+淋巴细胞亚群,观察照射及胸腺注射对它们的影响情况;H~3掺入法分别于小17和d0行A、B、C三组大鼠外周血淋巴细胞(效应细胞)与豚鼠外周血淋巴细胞(刺激细胞)间单向混合淋巴细胞培养,观察照射及胸腺注射对大鼠淋巴细胞功能的影响;于d-17流式细胞仪法检测A、B、C三组大鼠胸腺细胞表面及C组大鼠肝、脾和外周血淋巴细胞表面豚鼠MHC-Ⅱ类抗原的表达情况;观察四组供心排斥后的光镜及电镜表现。同时为观察异种移植间胸腺修饰途径对天然抗体的产生是否有影响,另设腹腔注射组,再分为a、b、c三组,其预处理方法分别与A、B、C三组相同,但在手术日(d0)不行心脏移植,代之而行受体腹腔内注射豚鼠脾细胞抗原(5×10~6个/只),隔一周后观察天然抗体水平的变化。 结果:在心脏移植组中:1.存活时间B组(31.2±5.08h)、C组(32.3±3.38h)和A组(24.1±5.81h)均较O组(0.34±0.11h) 胞腺修饰预处理受体对异种小动物心胚移扯兑迂排斥反应的作用研咒 泅耍 明显延长p功刀1),差别非常显著,B组和C组较A组明显延长 J<O*5),差别显著;C组与B组无明显差别 J叩*5。2.大鼠接 受 3.5 Gy全身照射后外周淋巴细胞于照后第 3天降至最低水平,由 (20.02士2.31)X10’个几下降为(2.sl士0.87)X10’个几,下降幅度 87.410。此后缓慢回升,到第七天升至门.53士l.62)X10’个几,到 第 14 天升至门.74士3.29)X10’个几,回升到照射前的 68*3%。3. 大鼠外周血 CD。“T细胞百分比 *) B组(30.47上4*2%)和 C组 臼1.33士5*9%)低于A组(*.sl士5.3*%),差别显著 o<0*5); C组与B组无明显差别o>0刀5人大鼠外周血*k*细胞百分比 (do):B组(60.40土 0.73%)和 C组(53.98士 8.98%)高于 A组 27.80 士2.“%),差另显著J <0刀5)C组与B组无明显差另 ( >0刀5)。 4.混合淋巴细胞培养刺激效应:B组(1667.8土224.3)禾 C组(1237.0 上198.5)明显低 于A组(2264二士门8.8),差别一常显著(P<0*1); C组低于B组,差别显著0叼刀引。5.C组大鼠供心排斥后取胸腺 细胞悬液测其细胞表面豚鼠MHC-11类抗原,结果表达(流式细胞 仪)为 门刀2士 5.13%;同时该大鼠外周血、肝、脾等组织细胞表面 均未检出有豚鼠MHC干类抗原的表达;A、B 组大鼠胸腺细胞表 面豚鼠MHC刁类抗原的表达为0。6.三组病理均呈延迟性异种排 斥改变。 在腹腔注射组中:大然抗体 l咖水平U X b组K0.3士 14.46%) 和 c组(46.27士3.68O)明显低 于 a组(78.46上10.14%),差别习常 显著o刊刀 1): C组与 b组无明显差别J叩刀5);腹腔注射后U7) I测水平减去腹腔注射前山J)I咖水平:b组32.46土 9.88o) 和c组(28*9士6.刀%)与a组门0刀1土8.66%)间差另显著(P<0刀1), C组与 b组无明显差别J>0刀5人天然抗体 IgG水乎U1):b组 (5.58士2.48%),。组(4.33土1.78%)与a组(4.37士1.48%)三组 问无显著差别 o列刀5人 腹腔注射一周后 U7 ) 与腹腔注射前N 1)IgG差值:b组(68.26士10.35%)与a组(84.31士3.31%),c 二二二 h n


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