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抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选

江淼  
【摘要】: 本研究从活化血小板免疫小鼠的脾淋巴细胞中分别克隆出小鼠免疫球蛋白的重、轻链可变区(V_H和V_L)基因,将V_H和V_L在体外拼接成单链抗体(ScFv)基因后转入噬菌体载体,使单链抗体分子展示在噬菌体表面,从而成功构建了抗血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库。以血小板膜表面数种受体糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa、Ⅱb/Ⅲa复合物及重组凝血酶受体PAR-1(rPAR1)为靶抗原从该文库中筛选各自的特异性单链抗体。靶抗原GPⅡb、GPⅢa、GPⅡb/Ⅲa以亲合层析方法从血小板裂解液中提取,rPAR1以重组蛋白的形式在大肠杆菌中表达,表达产物具有与天然PAR-1分子相似的活性和功能。 从文库中筛选出的单链抗体克隆经测序证实符合抗体可变区结构特点,对其中抗rPAR1的单链抗体克隆APAR31进行了表达,得到了有抗原结合能力的单链抗体分子,同时也证实了所建噬菌体文库的有效性。上述工作为噬菌体展示技术在血栓与止血领域的应用奠定了基础。


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