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凋亡肿瘤细胞负载的脐血树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫反应

殷虹  
【摘要】:树突状细胞(dendritic cells. DCs)是已知体内功能最强的专职的抗原呈递细胞(antigen presenting cells APC)。DCs能有效的摄取,加工及呈递抗原,并能刺激未致敏T细胞的增殖与活化,是启动、调控并维持体内特异性免疫诱导的中心环节。制备肿瘤特异性DCs疫苗免疫肿瘤患者,可以有效的激发特异性的持久的肿瘤免疫诱导。这已经成为肿瘤免疫治疗的一个热点,并在临床研究中取得了令人振奋的成果。 本研究评价了凋亡的卵巢癌细胞负载的DCs疫苗的主动免疫肿瘤作用,观察负载肿瘤抗原的DCs体外激活异体混合淋巴细胞效应和激活的细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte CTL)对卵巢癌细胞的杀伤效应,寻找最佳的DCs体外诱导途径及成熟调控,激发高效的抗卵巢癌免疫反应,DCs疫苗在动物试验中应用数量,次数及免疫途径,从而为临床试验奠定基础,为卵巢癌的生物治疗提供新的解决方案。 目的:制备人卵巢癌细胞系HO-8910细胞的凋亡细胞,用于负载脐血树突状细胞,评价AP-DC疫苗体外激活异体混合T细胞效应和激活的细胞毒性T细胞(CTL)对卵巢癌的杀伤效应,进一步评价AP-DC疫苗在SCID小鼠中的主动免疫治疗作用。 方法:采集健康足月孕妇的脐血,分离脐血单核细胞(cord blood mononuclear cell CBMNC),用rhGM-CSF及rhTNF配合诱导分化为DCs,选取早期凋亡的卵巢癌细胞系HO-8910,负载CBMNC-DCs,体外用~3H-TdR掺入法测定肿瘤抗原负载的DCs对异体外周血混合T淋巴细胞的体外活化效应,MTT法检测活化的CTL对人卵巢癌细胞系HO-8910肿瘤细胞的杀伤作用,同时应用肿瘤抗原负载的DCs及单纯的肿瘤凋亡细胞,单纯的DCs开展SCID小鼠的主动免疫治疗,观察肿瘤的生长情况,以研究凋亡肿瘤细胞负载人单核来源的树突状细胞的生物学特性。 结果:脐血分离的CBMNC贴壁后在细胞因子rhGM-CSF、rhTNF-α配伍作用下体外诱导分化为具有典型形态和表型的DCs,以顺铂诱导人卵巢癌细胞凋亡后,取早期凋亡肿瘤细胞负载的DCs与异体混合T淋巴细胞体外共培养后,T细胞增殖加快,成功诱导出肿瘤特异性CTL。在效靶比1:10、1:50、1:100负载抗原的 凋亡肿瘤细胞负载的脐血树突状细胞体外诱导抗卵果癌免疫反应______中文提要 DCs刺激指数较未负载组刺激指数高,在10:1、5(l:1、100:1三种效靶比的杀伤 效应实验中,抗原负载DCs活化的CTL较未负载流原和未激活组杀伤效率高,且 随着效靶比的增加,杀伤率增大。采用TNF一Q刺激和培养基对照分布自己成熟的 AP一DC疫苗均可抑制肿瘤生长,以TNF一Q刺激的疗效最佳(P0.05),与坏死肿瘤 细胞负载的DCs疫苗疗效比较,同一病理类型凋亡仲瘤细胞负载的DC疫苗的疗效 最佳(P0.05),与单纯的DCs及单纯凋亡细胞相比,顺铂诱发的凋亡肿瘤细胞负载 人CBMNC一DC刺激机体T细胞和激发的CTL体外杀伤率最高。 结论:CBMNC抗原在GM一CSF、IL一4、TNF一Q的作用下诱导分化为功能性的DCs, 顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞负载DC(AP一DC)疫苗抗原有效的激活体外CTL,有 效地诱导特异性抗卵巢癌免疫反应,有效抑制荷瘤小鼠肿瘤生长。


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