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家蚕生物反应器研究

何泽  
【摘要】:桑蚕生物反应器主要有两种形式;转基因桑蚕(transgenic silkworm)和杆状病毒表达载体系统(Baculovirus Expression Vector System,BEVS)。 我们将由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)IE-1 基因启动子及其控制下的hGM_CSF 基因克隆到PigA3GFP 中,构建了家蚕转基因载体PigA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将此载体与其辅助质粒helper-pigA3 导入家蚕,获得了发绿色荧光的家蚕。提取家蚕基因组DNA 用PCR 法可检测hGM-CSF 基因,推测hGM—CSF 基因已整合进家蚕的染色体,对G3 代转基因家蚕用ELISA 进行hGM-CSF 的活性测定,结果表明转基因家蚕冻干粉中hGM-CSF 的量为95ng/100mg。 另外,我们将SARS 病毒的M 蛋白完整基因克隆进原核表达载体pET28a(+), 在大肠杆菌BL21 中诱导表达,分析表明大肠杆菌中表达的重组M 蛋白的分子量为28KD,与理论值相符,此外还有一条分子量为18kDa 左右的条带,推测与大肠杆菌密码子的偏爱性或表达产物的降解有关;同时将M 蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His 中,用BEVS 表达了M 蛋白。SDS-PAGE、Western Blotting 分析表明,而用杆状病毒表达的重组M 蛋白的分子量为30KDa 比理论值25.96KDa 高,推测与表达产物的翻译后加工如糖基化有关。


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