收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白的表达对Ⅱ型血管内皮细胞激活的影响的研究

周晓彤  
【摘要】:背景: 器官移植现在已经成为治疗终末期器官功能衰竭的有效手段,为缓解临床同种供体的不足,异种器官作为最可能的供体来源越来越受到重视。然而,异种器官移植作为远缘移植,其面临的排斥反应较同种移植更为强烈、复杂。目前,异种移植面临的主要障碍是延迟性排斥反应,在这一过程中,由诱生抗体诱导的移植物Ⅱ型血管内皮细胞激活是异种移植物功能丧失的关键。本课题利用RNA 干扰(RNAi)技术特异性的抑制血管内皮细胞中核因子κB(NF-κB)的表达,研究小干扰RNA(siRNA)对异种移植延迟性排斥反应中Ⅱ型血管内皮细胞激活的抑制作用,探讨RNA 干扰技术在异种器官移植中的应用前景。 方法: 1.将昆明小鼠(体重20-25g)颈椎脱臼处死,无菌状态下完整取出其胸、腹主动脉,利用植块法在含有20%胎牛血清的DMEM 培养液中进行小鼠动脉血管内皮细胞的原代和传代培养。倒置相差显微镜下观察内皮细胞的形态和生长特性,进行血管内皮细胞中Ⅷ因子相关抗原的检测鉴定。 2.设计并体外化学合成小鼠NF-κB p65 的siRNA;同时筛选对小鼠血管内皮细胞(EOMA)有较高转染效率的转染试剂,并进一步优化该转染试剂在转染小鼠NF-κB p65 的siRNA 时的转染条件。 3.将EOMA 细胞分为四组:(1)空白对照组(细胞内不加任何干扰因素);(2)阴性对照组(脂质体不携带siRNA);(3)NF-κB siRNA 组(细胞转染NF-κB siRNA);(4)scramble siRNA 组(细胞转染scramble siRNA)。于转染前一天,在24 孔板中接种EOMA 细胞,共12 孔,加入不含抗生素的适量的DMEM 培养液(含10%的FBS),转染时细胞的汇合度要达到50-70%。分别在转染后的24h、48h、72h 时以及未转染时(0h)用TRIzol 法提取相应各组细胞总RNA,行RT-PCR 测定细胞内NF-κB p65 mRNA 水平;同时提取各组细胞总蛋白,行Western blot 测定各组细胞NF-κB p65 蛋白。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周晓彤,沈振亚,于曙东,余云生,叶文学,黄浩岳,焦鹏,滕小梅;阳离子脂质体介导小干扰RNA转染EOMA细胞时转染条件的优化[J];徐州医学院学报;2005年06期
2 庄晓明;肖红;武卓;;小干扰RNA逆转人乳腺癌细胞MCF-7多药耐药的体外研究[J];中国临床药理学杂志;2010年01期
3 肖翠英,张思仲;RNA干扰研究的新进展[J];医学分子生物学杂志;2004年02期
4 周伟,沈薇;RNA干扰在肝病研究中的进展[J];国外医学.消化系疾病分册;2004年05期
5 廖银花;贺修胜;;RNA干扰研究进展[J];现代生物医学进展;2007年05期
6 吴正思;王彪;;RNA干扰及其在医学研究中应用的进展[J];医学综述;2008年06期
7 于大海;曹莹;姚志文;李敬;陈海波;郝洁;;载体携带小干扰RNA抑制Tca8113细胞血管内皮生长因子的表达[J];华西口腔医学杂志;2008年05期
8 严金川;王标;徐良洁;杨萍;王翠平;;CD40 siRNA阻断CD40-CD40L轴对HUVEC增殖及迁移的影响[J];江苏医药;2010年21期
9 李丹;RNA干扰技术在抗HIV-1感染中的实验研究[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2003年03期
10 白丽霞,赵超,李小平,王建六,魏丽惠;siRNA对宫颈癌细胞系HPV16 E6基因的作用[J];中国妇产科临床杂志;2005年04期
11 薛秀兰;林菊生;宋宇虎;蔡晓坤;周鹤俊;;靶向leptin基因的siRNA对大鼠肝星状细胞生物学特性的影响[J];华中科技大学学报(医学版);2006年03期
12 牛坚;李向农;黄建;韩泽广;;携带沉默IGFIR shRNA和表达Wtp53的重组慢病毒的构建和鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2007年04期
13 李发武;卢放根;余治健;王文琦;;抗血小板衍生生长因子小干扰RNA表达质粒构建及其对肝星状细胞的影响[J];中华实验和临床感染病杂志(电子版);2008年02期
14 牛海静;王邦茂;方维丽;曹晓沧;丁娟娟;;特异性siRNA抑制胃癌细胞IGF-ⅠR表达的研究[J];天津医科大学学报;2008年02期
15 王怡;陈钢;陈必成;刘佳明;黄陈平;;EphrinA1基因小干扰RNA的构建及其在Huh-7细胞中的沉默效应[J];温州医学院学报;2009年06期
16 王璐;何永林;李芳菲;彭彦;姜蓉;王亚平;;小干扰RNA沉默胚胎生殖细胞Nanog基因的表达[J];生殖与避孕;2010年01期
17 胡金霞;张菡菡;孔丽君;于媛;;siRNA抑制RASSF1A表达对Hela细胞增殖和凋亡的影响[J];滨州医学院学报;2010年03期
18 蒋磊;王代友;陆新萍;;siRNA抑制人Tca8113/CDDP细胞多药耐药相关蛋白表达的研究[J];口腔颌面外科杂志;2011年02期
19 李善平;刘海威;程乐;张虎;曹登科;李政;;VEGF siRNA抑制人胰腺癌PANC-1细胞体外生长的研究[J];中国普外基础与临床杂志;2011年06期
20 庄永华;RNA干扰及其抗病毒作用[J];西部医学;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱雄翔;陈璧;汤朝武;徐明达;;烧伤病人血清对培养人血管内皮细胞DNA合成及粘附分子ICAM-1 PECAM-1表达的影响[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
2 庹勤慧;廖端芳;;金粉蕨素抗氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡与ERK的关系[A];湖南省生理科学会新世纪学术年会论文摘要汇编[C];2002年
3 郝群;李大金;朱影;袁敏敏;王明雁;孟毅;;补肾宁心方对人单核-血管内皮细胞粘附的影响[A];海峡两岸中西医结合学术研讨会论文集[C];2003年
4 张杰;王淑娜;王杰;李聪伶;王清秀;;雷公藤内脂醇在体外人脐静脉血管内皮细胞的c-fos基因mRNA表达的研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
5 魏跃钢;闵仲生;陈垒;温智君;;嗜酸性粒细胞增多性血管淋巴样增生一例[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
6 曾明;郑水庆;肖振宇;陶凯忠;许景峰;;葛根黄酮及银杏总提取物对高糖损伤血管内皮细胞的保护作用[A];2002中医药博士论坛——中医药的继承、创新与发展[C];2002年
7 陈健;张陆;陈柏楠;;同型半胱氨酸致动脉粥样硬化机制的研究进展[A];2009全国中西医结合周围血管疾病学术交流会论文集[C];2009年
8 蒲素;余叶蓉;龙洋;;炎症因子对胰岛素抵抗动物模型血管内皮细胞功能影响的研究[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年
9 曹阳;黄小园;孙立石;周剑峰;;高表达Tim-3分子是淋巴瘤血管的一种异常特征[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年
10 唐菁;张玲;李翠玲;顾洪涛;杨尚军;阴海鹏;温培娥;;淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和抑制血管内皮细胞生长[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周晓彤;利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白的表达对Ⅱ型血管内皮细胞激活的影响的研究[D];苏州大学;2005年
2 熊思齐;促红细胞生成素在视网膜新生血管形成中调控作用的研究[D];中南大学;2009年
3 闵晓洁;端粒酶活性表达的调控对视网膜新生血管形成影响的实验研究[D];青岛大学;2009年
4 蒋海河;不同损伤因素对血管内皮细胞释放vWF、PAI-1和t-PA的影响[D];中南大学;2008年
5 杨宏伟;糖尿病大鼠视网膜组织CTGF、VEGF、TGF-β_2作用机制和CTGFsiRNA的干预作用[D];中国医科大学;2008年
6 魏军;NK细胞在子痫前期血管内皮细胞损伤中作用[D];中国医科大学;2006年
7 李涛;1,25-(OH)_2D_3作为生物活性因子在组织工程骨中的应用[D];苏州大学;2005年
8 沈传陆;在肿瘤坏死因子α作用下血管内皮细胞PDGF-B链基因转录调控的研究[D];中国协和医科大学;1998年
9 李东;血管内皮细胞miR-125和miR-126的功能研究[D];第二军医大学;2010年
10 高咏梅;肿瘤坏死因子α和血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞组织因子表达及转录调控的影响[D];中国协和医科大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 夏漫辉;不同异种抗原胸腺修饰对延迟性异种排斥反应的作用研究[D];苏州大学;2005年
2 吴叔文;细胞内表达的小干扰RNA靶向丙肝病毒5’保守区的研究[D];武汉大学;2003年
3 陈瑶;IGF-1对受损血管内皮细胞的影响及机制研究[D];重庆医科大学;2011年
4 郝洁;siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2,-9及TIMP-1,-2蛋白表达的影响[D];广西医科大学;2009年
5 常青青;血管内皮细胞钙粘蛋白在2型糖尿病合并冠心病患者中的变化及意义[D];苏州大学;2012年
6 易伟斌;培养的血管内皮细胞替代自体的角膜内皮细胞实验研究[D];昆明医学院;2007年
7 朱文琴;液体复苏对脓毒性休克患者血管内皮细胞功能的影响[D];浙江大学;2005年
8 陈丽娜;参莲方对大鼠动脉粥样硬化形成过程的初步研究[D];山东中医药大学;2005年
9 黎昌莉;美洲大蠊提取物诱导血管内皮细胞迁移的初步研究[D];重庆大学;2010年
10 彭智;siRNA逆转白血病细胞K562/A02多药耐药的研究[D];重庆医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张天华;美完成基因“沉默”技术的重要实验[N];中国医药报;2003年
2 记者 王艳红;致病基因可以“沉默”[N];新华每日电讯;2003年
3 万同己;VC、VE对DM患者肾脏的保护作用[N];中国医药报;2003年
4 河北省职工医学院附属医院中西医内科 刘涓;别把小葱不当菜[N];保健时报;2010年
5 卢冬虎;靶向性TNF帮助化疗药物渗透[N];中国医药报;2004年
6 日信;基膜培养使细胞“坚强”[N];医药经济报;2003年
7 记者杨健;肿瘤细胞遨游太空后发生变化[N];人民日报;2003年
8 驻京记者 王勇;让致病基因“沉默”[N];文汇报;2003年
9 丁志山 沃兴德;中药对血管生成影响的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 董德伍;体外反搏研究进入新阶段[N];中国中医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978