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过氧化物酶体增殖体激活体受体γ(PPARγ)激动剂的抗动脉粥样硬化机制研究

王育林  
【摘要】:目的:过氧化物酶体增殖体激活体受体(PPARγ)激动剂能抑制ApoE基因剔除的雄性小鼠的动脉粥样硬化的形成,但其机制仍未完全明了,本研究通过PPARγ激动剂罗格列酮对高胆固醇血症兔的腹主动脉粥样硬化斑块的干预来探讨PPARγ激动剂对一氧化氮合酶(NOS),基质金属蛋白酶(MMPs)和β-钙联蛋白(β-catenin)的调控。 方法:(1)建立动物模型和分组:对照组(A组)6只兔予以正常饲料,其余各组喂高脂饲料,2周后行腹主动脉拉伤术,术后继续每日喂高脂饲料4周,同时分为模型组(B组,6只);阿托伐他汀组加用阿托伐他汀5mg/kg(C组,6只);罗格列酮组加用罗格列酮3mg/kg(D组,6只);联合用药组(罗格列酮3mg/kg和阿托伐他汀组5mg/kg(E组,6只)。(2)术前和至实验结束时取各组兔的经耳中央动脉采血,采用氧化酶法检测血清甘油三酯(TG)总胆固醇(TC);实验结束后光镜标本测量血管壁的内中膜厚度。(3)取100mg左右腹主动脉组织加入9倍匀浆介质研磨后取上清液,用一氧化氮合酶分型试剂盒检测eNOS和iNOS的活力。(4)采用Trizol-氯仿-异丙醇一步法提取兔的腹主动脉组织的总RNA,纯度检测合格后,取总RNA做逆转录合成cDNA,根据各对引物所需条件进行PCR,PCR产物经图像分析系统扫描后半定量评价表达水平。将腹主动脉剪成长1mm于DMEM无血清培养24小时。取上清液,经明胶酶谱法和逆酶谱法测定MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2的活性图像扫描分析。(5)提示各组兔腹主动脉总蛋白后,进行电泳电转膜,用一抗和二抗进行免疫印迹反应显色图像扫描分析检测PPARγ和β-catenin的蛋白表达。(6)利用MMP2和β-catenin的鼠抗人单抗进行免疫组化分析,观察其着色颗粒的变化。 结果:(1)高脂饲料喂养的各组兔于术前及实验结果时体重,血总胆固醇,甘油三酯水平无差异,但血TG和TC较对照组显著增高。罗格列酮和联


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