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鼠抗人B7-1功能性单克隆抗体的研制及应用研究

石云杰  
【摘要】:B7分子主要表达在树突状细胞(DC)、巨噬细胞及B细胞等抗原递呈细胞(APC)。APC表达的B7分子与T细胞表达的CD28分子结合,转导T细胞活化所需的共刺激信号,促进细胞因子的分泌。对免疫应答起激发作用;而B7分子与其另一天然受体即表达在活化T细胞上的CTLA-4结合,则阻止T细胞的活化与增殖,对免疫应答起抑制作用。B7-CD28/CTLA-4共同调控免疫应答的平衡与稳定。 共信号分子的特异性抗体,可模拟或阻断共信号。该类抗体可为深入研究共信号的生物学效应及分子机制提供重要的手段。同时通过特异抗体增强或减弱共信号转导,对免疫功能低下或异常升高的疾病具有治疗作用。因此,B7分子单克隆抗体的研制在基础研究及临床应用中具有重要价值。 1.鼠抗人B7-1单抗的研制及特性鉴定 以高表达膜型B7-1分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Daudi为免疫原,采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以人B7-1基因转染小鼠成纤维细胞株(L929-B7-1)为阳性筛选细胞,经反复筛选及克隆化培养,获得一株稳定分泌特异性鼠抗人B7-1单抗的杂交瘤细胞株,命名为10D9。快速定性试纸法分析,10D9重链为IgG1,轻链为κ链。经体外连续传代培养,液氮冻存,复苏后生长良好,抗体分泌性能稳定。染色体数目分析显示,杂交瘤细胞株的染色体在100条以上。采用本室建立的腹水诱生法制备单抗,腹水形成阳性率约为80%以上,腹水的收获量平均为5ml/只。经ProteinG亲和层析柱分离纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.5~2.0mg/ml。纯化抗体用于间接免疫荧光检测的用量为0.2~1μg/l×10~6细胞。经Western Blotting分析,10D9能与B7-1分子特异性结合,表明10D9是B7-1的特异性单抗。该单抗能识别人B淋巴瘤细胞株Daudi、Raji以及人肺癌细胞株H1299表达的膜型B7-1分子。同时能用于肿瘤组织B7-1分子的免疫组化分析。


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