野桑蚕人工饲育及其CYP6基因cDNA片段克隆的研究

【摘要】： 农林害虫中有80%为鳞翅目昆虫,桑园害虫野桑蚕(Bombyx mandarina M.)属鳞翅目蚕蛾科,和经济昆虫家蚕(Bombyx mori L.)具有共同的祖先,对野桑蚕和家蚕进行抗性方面的比较研究,将为鳞翅目害虫的防治和家蚕抗性育种提供重要的理论依据。已有研究表明,P450超家族中的第六家族CYP6和昆虫抗药性有关。野桑蚕是野外昆虫,供试虫源的均一性和全年不断供给很困难,为解决这一难题,本文首先研究了中国野桑蚕的人工孵化及人工饲育,并对其CYP6基因cDNA片段进行了研究。 1.搜集了野桑蚕越年卵,进行了即时浸酸、冷藏浸酸、滞育卵冷藏浸酸和越年卵春季催青前浸酸。结果表明,野桑蚕越年卵即时浸酸,以盐酸比重1.065～1.075,液温46℃,时间5 min为宜;冷藏浸酸,以盐酸比重1.092,液温47.8℃,时间6 min为宜;滞育卵冷藏浸酸,以盐酸比重1.092、液温47.8℃、时间6 min浸酸,没有冷藏日数(80~100 d)愈长孵化率愈高的倾向;越年卵春季催青前以盐酸比重1.092、液温47.8℃、时间6 min浸酸,可以明显缩短孵化期,提高孵化率。 2.用家蚕低成本饲料饲育野桑蚕,在催青期温度25℃、饲育温度27~25℃、光照条件1~2龄12L12D、3~5龄15L9D的条件下,野桑蚕2龄起蚕率为31.3%,幼虫期20~48 d,雌、雄蛹体质量分别为0.45 g、0.25 g,蛹期17~23 d,雌蛾平均产卵266粒,产滞育卵的母蛾占45.0%。 3.分别以野桑蚕和家蚕的总RNA为模板,采用特异引物,利用RT-PCR法均扩增出了长度为1101bp的新的cDNA片段(GenBank登录号分别为:DQ504439、DQ504437)。序列比对结果表明,野桑蚕与家蚕核苷酸序列有22个碱基的差异,同源性为98.0%,氨基酸序列有6个氨基酸差异,同源性为98.4%。序列特征和比对显示,野桑蚕和家蚕的1101bp的cDNA片段为CYP6家族新成员。