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血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)促进骨缺损修复的实验研究

刘伯龄  
【摘要】:一、血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)及其表达的检测 目的为了探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染骨髓基质干细胞(BMSCs)的表达。 方法体外分离、培养大鼠骨髓基质干细胞,传代培养后以1ulPcDNA3.1-hVEGF165:3ul阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过RT-PCR、免疫组化S-P法检测转染细胞外源性VEGF165基因瞬时表达与稳定表达,采用ELISA进行其VEGF蛋白表达量的检测,并观察转染后细胞生长增殖情况,与空载体转染组和未转染组相对照。 结果基因转染后细胞生长增殖与对照组相仿,基因转染后48h和筛选培养4周后,RT-PCR和免疫组化都能检测到VEGF基因的转录及表达,而空载体转染组及未转染组未见其转录及表达。ELISA定量测定显示转染细胞VEGF表达在1周内逐渐增高,1周后则逐渐下降。 结论1、通过脂质体能成功的将hVEGF165基因转入BMSCs并转录及表达VEGF蛋白,其蛋白表达量在1周时达最高,然后其表达分泌量逐渐下降。2、基因转染后BMSCs经G418筛选培养后可获得稳定表达。 二、hVEGF165基因转染对BMSCs生物学特性的影响及其分泌蛋白功能的检测 目的观察hVEGF165基因转染后BMSCs分泌的VEGF蛋白是否有生物学效应及其对BMSCs成骨表型的影响。 方法体外分离、培养大鼠肾微血管内皮细胞,并通过免疫组化方法对其进行鉴定。采用MTT法观察基因转染后48h转染组、空载体转染组、未转染组的细胞上


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