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经冠状动脉骨髓间充质干细胞心肌内移植治疗急性心肌梗死的实验及临床研究

陈绍良  
【摘要】: 目的:已有的研究证实骨髓干细胞心肌内移植可以显著改善梗死后心肌的功能,但是尚未见有关骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死的临床研究。为此我们设计本前瞻性研究,以期系列观察研究经冠状动脉内注射骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗急性心肌梗死(AMI)的疗效,并比较放射性心肌核素显像、经胸超声心动图和心脏电机械标测测定存活心肌的特异性及敏感性。 方法: (一)实验研究:选用雄性家猪(购自于江苏省农科院畜牧研究院),体重介于20—30 kg。以球囊封堵左冠状动脉前降支制作心肌梗死模型,观察24 h后,存活者按心肌梗死造模次序随机分为治疗组和对照组。氯氨酮(25 mg/kg, IM)麻醉后,在无菌条件下,用含肝素6000u的注射器抽取髂骨骨髓30 ml。用Ficoll-Paque (1.077 g/ml)分离液分离出单个核细胞,1500 rpm离心10 min,洗两次,将离心后的细胞打散并以1×107个/ml细胞接种在75cm2的培养瓶内。1天后去掉悬浮细胞,每3天换液,7-10天后当细胞近融合时,0.125%的胰酶消化,1000rpm离心5min,生理盐水洗2次,取1×107拟行注射的细胞,100目滤网过滤,重悬于含肝素2000u的5ml生理盐水备用。标记方法应用嘧啶的类似物溴化脱氧尿嘧啶(BrdU,Sigma公司)或荧光PKH26(Sigma公司),注射前2天,在培养液中加入10μmol/L的BrdU;部分猪,在注射前,给其MSC进行PKH26荧光染色。用间接免疫荧光法检细胞的表型。在心梗前、注入MSC前、处死前三个时间点,插入猪尾巴导管,连接压力换能器,记录左室收缩压(LVSP,left ventricular systolic pressure)、左室舒张末压(LVEDP,left end-diastolic pressure)、压力升高最大速率(+dP/dt,peak rate of pressure rise)和压力下降最大速率(-dP/dt ,peak rate of pressure fall ),每次记录前需稳定15 min。在处死前,麻醉后送入核素室,静脉注射99Tcm-MIBI显像,行心电检测,行心肌核素显像检查,检测梗塞相对面积、心肌灌注评分以及左室射血分数(LVEF)。


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