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脐血CD133+造血干/祖细胞生物学特性的研究和抗CD133单克隆抗体的研制

王明元  
【摘要】:有效选择造血干/祖细胞(HSPC)对临床造血干细胞移植和基础研究均至关重要。过去的十几年来,CD34抗原一直被作为HSPC的标记,CD34+造血细胞业已广泛应用于基因治疗和HSPC扩增及移植领域。然而,近年来的研究显示,CD34+细胞是异质性的群体,其中仅包含一部分的造血干细胞,CD133分子可能是一较CD34分子更为早期的造血干/祖细胞表面标志。随着研究的进展,CD133分子在造血细胞扩增、干细胞移植、移植物净化、疾病预后判断、免疫治疗和基因治疗等方面将显示更重要的价值。本课题研究CD133+造血干/祖细胞的生物学特性,探讨其诱导分化和体外扩增,并克隆CD133基因全长及研制抗人CD133单克隆抗体,为进一步研究和利用CD133打下基础。 1.1 脐血CD133+细胞生物学特性的研究 研究表明CD133分子可能是较CD34分子更为有价值的HSPC表面标志,独特的5跨膜结构尤其是亮氨酸拉链和胞内段的酪氨酸预示着潜在的功能,进一步研究CD133分子表达细胞对造血机制的认识及临床上的应用均具有重要的意义。 本研究从脐血中磁珠分选获得CD34+CD133+和CD34+CD133-两群细胞,继而进行体外细胞扩增培养,结果表明两群细胞均得到显著扩增。相同扩增体系中CD34+CD133-细胞扩增倍数均高于CD34+CD133+细胞。对CD34+CD133+细胞扩增后细胞表面抗原谱的动态变化进行分析显示,CD34+CD133+细胞在扩增过程中向CD34+CD133-细胞演变,进而最后分化为CD34-CD133-细胞;细胞集落培养表明CD34+CD133+细胞体外集落细胞形成多于CD34+CD133-细胞,但没有显著性差别。但是CD34+CD133+细胞以CFU-GM集落为主,而CD34+CD133-细胞则BFU-E集落占多数;代表早期祖细胞的CFU-GEMM和HPP-CFU的集落数量在CD34+CD133+


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