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巨噬细胞在混合嵌合体诱导异种免疫耐受中作用的实验研究

朱勇  
【摘要】: 目的:在豚鼠到大鼠实验动物模型中,利用脂质体包裹clodronate清除受体巨噬细胞后,采用非清髓性的预处理方案诱导建立混合嵌合体,研究巨噬细胞在建立非协调性异种混合嵌合体中的作用。并在此基础上,行豚鼠到大鼠的腹部心脏移植,研究混合嵌合体的形成对受体的免疫功能影响,探讨异种免疫耐受的机制。 方法:将SD大鼠(受体)30只随机分成3组:所有大鼠受体接受60Coγ射线全身照射,经环磷酰胺预处理,照射后4h内经尾静脉输注BMC 2x108/ml×0.8ml。A组仅输注豚鼠BMC;B组输注豚鼠BMC前输注不包含clodronate空脂质体;C组输注豚鼠BMC前输注包裹clodronate空脂质体。BMC移植后24小时用免疫组化法检查受体大鼠肝脏、脾脏中巨噬细胞清除情况;用流式细胞仪法测定BMC移植后24小时内不同时间点受体外周血中豚鼠细胞比例、24小时时受体脾、骨髓中豚鼠细胞比例,以及移植后21天、35天嵌合率;于BMC移植后21天,行MLR测定,并用流式细胞仪法测定T淋巴亚群的变化。 在成功建立混合嵌合体的基础上,行豚鼠到大鼠的心脏移植。实验随机分为六组:I组(空白组,n=5)、II组(CVF组,n=5)III组(CVF+clodronate脂质体组,n=5)、IV组(CVF+豚鼠BMC移植组,n=5)、V组(CVF+豚鼠BMC移植+空脂质体组,n=5)、VI组(CVF+豚鼠BMC移植+包裹clodronate脂质体组,n=5)。流式细胞仪法检测移植前后大鼠抗豚鼠IgG水平;记录移植物平均存活时间、检测移植物病理组织学。 结果:输注包裹clodronate脂质体后24小时受体大鼠肝脾(红髓及边缘带)中巨噬细胞消失,21天后与正常对照相比无差异。BMC移植后24小时内各时间点,C组大鼠外周血中豚鼠细胞比例均高于A、B组; 24小时时大鼠脾、骨髓中豚鼠细胞比例,C组亦明显高于A、B两组;比较21天及35天嵌合水平,C组明显高于A、B两组。21天时CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例均下降,各组CD4/CD8比值与对照组相比无差异。MLR显示耐受大鼠的免疫应答反应性降低,C组较其他组比最低。 心脏移植后,I组移植心表现为超急性排斥反应,II、III、IV、V、VI各组移植心存活时间分别为:306±45分钟、314±51分钟、366±35分钟、372±25分钟、424±32分钟,病理均表现为急性血管排斥反应改变。移植后抗豚鼠IgG水平均有轻微升高,VI组上升幅度最小。 结论:1、利用脂质体包裹clodronate的方法可建立清除巨噬细胞动物模型。2、巨噬细胞在BMC移植后迅速减少中起重要作用,在BMC移植前去除巨噬细胞可提高嵌合率。3、建立混合嵌合体虽然不能影响T细胞亚群的分布,但能使受者T细胞对供者抗原反应性降低,也可延缓与T细胞活化相关的IgG抗体升高。4、运用CVF克服超急性排斥反应的情况下,混合嵌合体能使豚鼠到大鼠心脏移植供心存活时间延长,并与嵌合水平成正相关。


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