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慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞生物学特性研究

陈晓晨  
【摘要】: 目的分离、纯化并鉴定慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia ,CML)患者骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC);研究其增殖、凋亡、致瘤性等生物学特性;观察其对肿瘤细胞株K562增殖及凋亡的影响。 方法获取并分离CML患者骨髓MSC,低血清培养液培养及传代,获得第三代(P3)至第五代(P5)MSC。光镜观察细胞生长形态,电镜观察细胞超微结构,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测免疫表型,油红O染色及Von Kossa染色检测其向脂肪及骨细胞分化。细胞计数法检测细胞增殖,FCM测定细胞周期及凋亡情况,软琼脂培养法及裸鼠皮下接种,观察其致瘤性。通过与K562细胞体外共培养及裸鼠皮下共接种,观察其对K562细胞增殖及凋亡的影响。 结果CML来源的MSC在光镜下观察,呈梭形,并平行排列成漩涡状生长,电镜下观察细胞胞质丰富,核质比大,表达CD44、CD73、CD90,不表达CD34、CD45、HLA-DR。在相应的诱导条件下,其可向脂肪及骨细胞分化,油红O染色及Von Kossa染色呈阳性。P3代细胞的倍增时间为(32.61±1.54)h,P4代细胞的倍增时间为(32.59±1.23)h,P5代细胞的倍增时间为(32.41±0.75)h,细胞周期测定P3代G0/G1期细胞百分比为(93.67%±1.66%),S+G2+M期为(6.33%±1.66%),未检出凋亡细胞。软琼脂培养法及裸鼠皮下成瘤试验均为阴性。与单纯K562细胞悬浮培养比(K562+MSC vs K562),MSC能促进K562增殖,倍增时间明显缩短([29.59±0.46]h vs [37.49±2.19]h,P 0.05) ,细胞周期也有明显变化: G0/G1期细胞减少([16.43%±1.67%]vs [32.23%±3.35%],P0.01),S期细胞增加([69.63%±3.09%]vs[59.37%±4.40%],P0.05),G2/M期细胞增加([13.93%±1.45%] vs[8.40%±1.05%],P0.01),细胞凋亡均不明显。裸鼠皮下共接种试验, K562+MSC组成瘤早于K562组([12.00±0.82]d vs[15.50±0.58]d,P0.01),其瘤体容积及瘤体重量也明显大于K562组者:瘤体容积([75.70±7.30]mm~2 vs [37.38±2.39]mm~2 , P 0.01) ,瘤体重量([0.64±0.08]g vs [0.32±0.06]g,P0.01)。 结论从CML患者骨髓中可以分离、培养出较纯化的MSC;该细胞群体体外具有较强的增殖能力及多系分化能力,不具备体内和体外致瘤性;在体外和体内其可促进K562细胞增殖。


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