收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

耐热超氧化物歧化酶基因的克隆表达及蛋白的纯化、相关酶学性质研究

邹媛媛  
【摘要】: 超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)是一种广泛存在于动-植物和微生物中的金属酶。它催化超氧化物阴离子自由基(O.2-)发生歧化反应,从而清除O.2-,在维持生物体内超氧阴离子自由基产生与消除的动态平衡中起着重要的作用。根据结合的金属离子不同,超氧化物歧化酶分为三类:第一类是Cu,Zn-SOD,第二类能与Fe2+或Mn2+或者两者中的任意一个都能结合,即Fe-SOD,Mn-SOD或Fe/Mn-SOD,第三类是Ni-SOD。 我们从一株地热芽孢杆菌(Geobacillus)的菌株中克隆得到三种sod基因,Fe/Mn-sod,Mn-sod和Cu/Zn-sod。分析表明三种SOD分别与Geobacillus kaustophilus HAT426菌株相应的SOD序列同源性最高。克隆这三个基因到毕赤酵母表达载体pPIC9中,电击转化宿主菌GS115,发现一株有微弱表达。克隆Mn-sod基因到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21菌株,蛋白表达量很高。蛋白纯化后比活达2726.7U/ mg。该酶在60℃高度稳定,80℃作用2.5个小时仍有70%的活力,90℃作用2.5个小时还有30%的活力。离子重组实验表明Mn2+对维持酶的活性非常重要。根据活性和非活性SDS-PAGE试验的结果,推测此酶为同型四聚体结构。 为获得东方粘虫颗粒体病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因组序列,本实验室采用随机克隆方法,建立了PsGV的质粒基因文库。通过对插入片段进行克隆鉴定和序列分析,获得了编码超氧化物歧化酶蛋白的基因(PsGV-sod)。该基因阅读框为462bp,共编码153个氨基酸。核苷酸和氨基酸同源性比较结果表明该基因与其他颗粒体病毒同源性较高,通过保守基序分析,认为其是铜锌超氧化物歧化酶。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 薛璟;汪维云;陈建华;;猪尿酸氧化酶基因的克隆及表达[J];安徽农业大学学报;2011年04期
2 李志芳;刘起勇;张卫东;宋秀平;栗冬梅;马怀雷;赵帆;孟凤霞;任东升;靳建超;林杰;吴海霞;;长角血蜱感染汉赛巴尔通体后血淋巴超氧化物歧化酶变化的初步研究[J];中国人兽共患病学报;2011年06期
3 王芳;华慧颖;李晓静;耿风华;;相关序列扩增多态性分子标记及其在植物研究中的应用[J];安徽农业科学;2011年23期
4 韩宝芹;冯伊琳;毕庆庆;刘万顺;隋正红;杨官品;;单环刺螠纤溶酶Ⅱ的基因克隆[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2011年Z2期
5 吴健谊;蒋太峰;谢剑君;张锴;杜则澎;许丽艳;;哺乳动物细胞CDK2系列表达载体的构建与表达[J];癌变·畸变·突变;2011年04期
6 齐志涛;张启焕;王资生;王爱民;黄贝;昌鸣先;聂品;;非洲爪蟾中一种长型肽聚糖识别蛋白的克隆与表达分析(英文)[J];动物学研究;2011年04期
7 刘晶晶;韩宏岩;许维岸;;黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的克隆与序列分析[J];安徽农业科学;2011年17期
8 白志毅;汪桂玲;李家乐;;三角帆蚌组织蛋白酶L基因的克隆和序列特征与进化分析[J];生物技术通报;2011年06期
9 彭梅;尹娜;谢天宏;葛长勇;张光明;李鸿钧;孙茂盛;;重组抗菌肽基因克隆及其Pichia pastoris表达工程菌的构建[J];云南大学学报(自然科学版);2007年S3期
10 张卫国;王小宁;林影;;脂肪酶基因克隆、序列分析、表达及其催化特性[J];食品科学;2011年11期
11 朱雯雯;林晓飞;张文波;许月英;高野博嘉;;兴安落叶松肌动蛋白基因的分离与序列分析[J];生物技术通报;2011年07期
12 杜翠红;苏文金;卢宝驹;刘光明;邱晓燕;曹敏杰;;鳜鱼(Siniperca chuatsi)幽门垂中两种胰蛋白酶的cDNA克隆及其生物信息学分析[J];海洋与湖沼;2011年02期
13 韩俊英;李健;李吉涛;常志强;陈萍;李华;;脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析[J];水产学报;2011年08期
14 王亚琴;钟开新;阳成伟;梁山;;石斛兰SIZ1基因的克隆及序列分析[J];华南师范大学学报(自然科学版);2011年02期
15 张月娟;张琨;万一;;响应面法优化重组hCu,Zn-SOD改构体发酵培养基[J];生物技术;2011年03期
16 陈蕾;李晔;苏秀榕;江锦坡;李太武;李振;周君;刘艳;夏长革;;浙江枝吻纽虫(Dendrorhynchus zhejiangensis)凝溶胶蛋白和肌动蛋白基因的克隆与序列分析[J];海洋与湖沼;2011年02期
17 席云亮;;大豆品种抗旱性研究[J];科技情报开发与经济;2011年21期
18 郭艳荣;常晓月;崔晓君;魏勋斌;朱乃硕;;eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化[J];生物技术通报;2011年06期
19 冯海燕;崔志峰;;微生物降解拟除虫菊酯类农药残留的研究进展[J];环境污染与防治;2011年08期
20 袁继红;龙欢;林瑞意;杨在清;;猪糖原合酶激酶3β基因的克隆、染色体定位和组织表达谱分析[J];中国畜牧兽医;2011年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 单世华;张廷婷;闫彩霞;李春娟;万书波;;抗黄曲霉花生种皮PcLOX2基因的克隆与初步鉴定[A];2009年中国作物学会学术年会论文摘要集[C];2009年
2 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
4 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
5 朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
6 吕海鹏;史俊南;赵守亮;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
7 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
9 张志春;张谷丰;罗光华;方继朝;;小菜蛾嗅觉膜原蛋白SNMP1基因的克隆表达[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
10 王翠;李世军;李闯;俸艳萍;彭秀丽;龚炎长;;鸭多巴胺受体1(DRD1)基因克隆与多态性检测[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 倪多娇;栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
2 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
3 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
4 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
5 胡根海;棉花Cu/Zn-SOD基因的克隆与表达的初步研究[D];中国农业科学院;2006年
6 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
7 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
8 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
9 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
10 李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 章轶锋;铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及重组干酪乳杆菌的构建[D];成都理工大学;2008年
2 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
3 刘占通;猪α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒活性研究[D];河南农业大学;2005年
4 张怡;重组鼠抗人CD19单链抗体的构建和表达[D];浙江大学;2006年
5 郝敏;玉米与大斑病菌构成的不同互作中基因表达的研究[D];河北农业大学;2006年
6 黄志强;产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆[D];福建农林大学;2006年
7 武鸿;嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究[D];浙江大学;2007年
8 余国武;腊梅脂转移蛋白基因克隆与功能的初步分析[D];西南大学;2007年
9 赵秀振;蓖麻蚕体液胰凝乳蛋白酶抑制剂调查及其基因克隆[D];中国农业科学院;2007年
10 马维;辣椒疫病抗性相关基因的克隆与分析[D];西北农林科技大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
2 刘越西 徐仁元 记者 金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
3 黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
4 许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
5 王婷婷;我国完成世界首例转基因克隆兔实验[N];科技日报;2007年
6 曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];团结报;2000年
7 王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
8 李建平;首例荧光转基因克隆猪所产猪崽再次被确认具有荧光特征[N];大众科技报;2008年
9 记者 王中宙;25只转基因克隆绵羊在内蒙古农业大学诞生[N];呼和浩特日报(汉);2010年
10 吴一福;四军医大构建HBV全基因克隆质粒细胞系[N];中国医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978