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AdLacZ基因修饰的山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨的实验研究

常庆  
【摘要】: 目的:应用AdLacZ基因修饰体外培养的山羊耳软骨细胞,与F127 pluronic支架材料复合,并植入裸鼠皮下,观察裸鼠皮下软骨形成的过程,判断软骨的来源,为进一步应用软骨分化因子基因修饰重建软骨的研究提供参数。 方法:实验于2004年11月—2006年12月期间在上海交通大学医学院附属第九人民医院完成,实验动物取体质量26~30 kg健康雄性山羊一只,6周龄体质量20克BALB/c裸鼠24只,随机分成4组,每组6只。体外培养山羊耳软骨细胞,转染AdLacZ基因,检测基因转染效率。将基因转染的细胞与可吸收生物材料F127 Pluronic混合形成细胞-生物材料复合物,注射到其中一组裸鼠皮下作为实验组,每只裸鼠背部皮下分别接种2个点。同样设计,分别以未转染基因的软骨细胞-材料复合物,软骨细胞,和F127支架材料注射到剩下的3组裸鼠皮下。裸鼠背部皮下均接种2个点,所有裸鼠术后第2、4周分别在接种点取材,标本行苏木精-伊红染色、阿利新蓝染色,并对4周标本行X-gal染色,II型胶原免疫组织化学检测。结果:所有动物实验均进入结果分析,无脱落。50 pfu/细胞可以获得80%的转染效率,第2周时LacZ组细胞-材料复合物形成了不成熟的软骨样组织,第4周LacZ组中央部位出现少量稍成熟的软骨,部分细胞有II型胶原阳性表达。冰冻切片X-gal染色提示细胞来自于植入的软骨-材料复合物。未转基因的软骨细胞-材料复合物组,其组织学及II型胶原免疫组织化学表现与LacZ组没有明显差别,而X-gal染色为阴性。单独注射软骨细胞和单独注射F127支架,在4周内则均未见到软骨形成。 结论:腺病毒载体可向软骨细胞高效转移目的基因,并可通过LacZ基因判断细胞来源;F127支架材料是软骨再生较为理想的支架材料。


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