转基因果蝇系的建立及其重组蛋白PCL的表达和分析

【摘要】： 目的利用模式生物果蝇表达PCL重组蛋白复合物,检测、纯化所表达的PCL蛋白,为研究PCL蛋白复合物的生物学活性及其在胚胎不同发育时期的作用提供依据。方法PCL基因经PCR扩增后,重组到pCaS83 HHF_PresCT载体,构建pCaS83 PCL_e表达载体。经显微注射果蝇胚胎,该表达载体整合于果蝇生殖细胞的基因组上,并建立PCL转基因果蝇系。 我们利用转基因果蝇系表达PCL蛋白,并进行多线染色体的免疫组化分析,检测PCL蛋白的表达。应用免疫沉淀法对PCL蛋白进行纯化,并分析其生物学功能。结果建立了表达重组PCL蛋白复合物的转基因果蝇系。尽管不同转基因果蝇系的PCL蛋白表达水平并不相同,但所表达的重组PCL蛋白与内源性蛋白具有相似的分布特征,并能部分代偿缺陷型PCL蛋白的功能。因为PCL重组蛋白复合物的C-末端带有HA-8×His-FLAG标记,所以可以利用抗FLAG抗体纯化转基因果蝇系不同发育时期的PCL复合物。 结论成功建立了转基因果蝇系并表达了重组PCL蛋白,为进一步纯化PCL蛋白复合物及其功能的研究奠定了基础。