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骨髓间充质干细胞在皮肤放射损伤救治中的作用

朱红燕  
【摘要】: 第一部分:人胎儿骨髓间充质干细胞分离纯化及其生物学特性的研究 目的体外分离、培养人胎儿骨髓间充质干细胞(FMSCs),并观察其生物学特性,建立稳定的FMSCs体外培养扩增体系。 方法取4个月胎龄的流产胎儿,无菌条件下分离胎儿四肢骨,PBS冲洗骨髓腔;采用Ficoll法分离胎儿骨髓腔冲洗液,离心后取单个核细胞层培养、扩增、传代,观察细胞的形态,采用MTT法观察细胞生长曲线及分裂指数曲线,研究其增殖及生长特征;应用流式细胞术测定FMSCs表面标记,并观察细胞生物学特性。 结果接种2天后,贴壁细胞呈梭形、多角形、成纤维细胞样形态。10天后开始传代,传代培养的潜伏期为24-36h,对数增殖期约为2-3天,第6天进入平台期。传代至15代后生长速度变慢;FCM检测显示,细胞高表达CD29、CD44及CD49e分子,低表达CD106、CD54、CD11b,而不表达CD34。 结论采用Ficoll密度梯度离心、贴壁筛选法及单克隆培养法可以分离、培养、扩增出较均一的FMSCs,形态单一、生长稳定、增殖性较强,可以用于细胞治疗的进一步研究。 第二部分:骨髓间充质干细胞促进急性皮肤放射损伤的修复 目的:探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对皮肤局部急性放射损伤的修复作用。 方法:雄性昆明小鼠46只(25g±2g),随机选取40只以3.6%水合氯醛腹腔麻醉,以能量为4MeV的电子线(1 Gy/min)照射小鼠臀部皮肤,面积为2 cm×1.5cm,总吸收剂量为40Gy,后将小鼠随机分为实验组和对照组各20只。实验组照射后即刻经尾静脉注射经CFDA SE标记的MSCs(2×10~7 0.1ml),对照组注射等量生理盐水,剩余6只不做照射处理,仅经尾静脉注射等量MSCs。观察实验组及对照组小鼠创面损伤情况及皮肤病理变化,免疫组化分析皮肤新生血管,观察MSCs在皮肤中的分布情况、了解MSC在皮肤Ⅲ°放射损伤的修复中的作用。 结果:将MSCs经尾静脉移植入实验组小鼠后,实验组皮肤创面愈合速度比对照组快4~6天。实验组创面损伤面积较对照组小,病理表现中表皮、毛囊、皮脂腺及胶原纤维的损伤程度均较同时期的对照组小鼠轻。实验组MSCs在皮肤及其他组织中广泛分布且数量明显高于未照射的小鼠;皮肤创面中的新生毛细血管数高于对照组。 结论:MSCs对局部皮肤放射损伤创面有明显有效的修复作用,其作用是在干细胞与创伤局部微环境相互作用下实现的。


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